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1、[目的]:探討異種同源KDRmRNA修飾的樹突狀細(xì)胞誘發(fā)抗肝腫瘤血管免疫、打破腫瘤免疫耐受的效果。 [方法]:用分子克隆技術(shù)構(gòu)建pmRNAIRES-hKDR,pmRNAIRES-mKDR,用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法建立表達(dá)KDR的腫瘤細(xì)胞模型;采用MEGAscriptSP6高產(chǎn)量mRNA體外轉(zhuǎn)錄試劑盒生成mRNA;樹突狀細(xì)胞的制備和培養(yǎng)按Lutz's方案稍加修改;用hKDRmRNA或mKDRmRNA致敏小鼠骨髓來源的DCs后免疫C57B
2、L/6小鼠,7天后取鼠脾細(xì)胞行乳酸脫氫酶(LDH)釋放法實(shí)驗(yàn),檢測(cè)特異性CTL殺傷活性;或給免疫小鼠皮下接Hepa1-6肝癌細(xì)胞,觀察荷瘤小鼠成瘤情況。 [結(jié)果]:hKDRmRNA/DCs免疫小鼠1周后其細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞殺傷活性明顯強(qiáng)于mKDRmRNA/DCs:在E:T為100:1、50:1、25:1情況下,殺傷率hKDRmRNA/DCs組分別為71.6%、55.8%、22.7%,mKDRmRNA/DCs組分別為48.2%、3
3、0.2%、15.4%,空白DC對(duì)照分別為19.2%、12.3%、6.9%,相同比例下每?jī)山M之間有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)hKDRmRNA/DCs免疫小鼠后1周接種1×106Hepa1-6肝癌細(xì)胞,2個(gè)月后仍有80%的小鼠無瘤生長(zhǎng);而mKDRmRNA/DCs免疫小鼠后1周接種1×106Hepa1-6肝癌細(xì)胞,2個(gè)月后只有20%未長(zhǎng)瘤,對(duì)照組小鼠2周內(nèi)全部長(zhǎng)瘤。 [結(jié)論]:異種同源KDRmRNA修飾的樹突狀細(xì)胞能有效的打破腫
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