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1、目的:建立一個(gè)同時(shí)具有破壞腫瘤血管內(nèi)皮和殺傷腫瘤細(xì)胞作用、適用于多種類型惡性實(shí)體瘤的T細(xì)胞過(guò)繼性免疫治療腫瘤新技術(shù).方法:應(yīng)用分子克隆技術(shù)重組嵌合性T細(xì)胞受體VEGF121-hinger-FcRγ(Vhγ),分別構(gòu)建逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的VEGF121-hinger-FcRγ轉(zhuǎn)移系統(tǒng)MSCVneo-Vhγ和綠色熒光蛋白(GFP)轉(zhuǎn)移系統(tǒng)MSCVhyg-GFP.采用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞系PT67,篩選離滴度的病毒感染細(xì)胞.從新鮮肝癌組織中分
2、離腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL),經(jīng)rhIL-2、CD3 McAb和CD28 McAb聯(lián)合刺激生長(zhǎng)后,用不同的病毒上清分別重復(fù)感染,篩選后的細(xì)胞分別取名為MSCVneo-TIL、MSCVneo-Vhγ-TIL和MSCVhyg-GFP-TIL.在熒光顯微鏡下直接觀察MSCVhyg-GFP-TIL表達(dá)熒光蛋白的情況,應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)目的基因的轉(zhuǎn)錄,應(yīng)用MTT比色法分析轉(zhuǎn)染TIL細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)的4種靶細(xì)胞的殺傷活性.其中成纖維細(xì)胞系NIH3T
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