乙型腦炎重組桿狀病毒疫苗的研究.pdf

1、分類號華中農業(yè)大學碩士學位論文乙型腦炎重組桿狀病毒疫苗的研究StudyontheReeombinantBaculovirusVaceineofJaPaneseEncePhalitis研究生:葉靜指導教師:陳煥春院士指導小組:曹勝波副教授肖少波副教授專業(yè):預防獸醫(yī)學獲得學位名稱:農學碩士研究方向:動物病原分子生物學及基因工程獲得學位時間:2008年6月22日華中農業(yè)大學動物科學與動物醫(yī)學學院二00八年六月3.2，5連接產物的轉化....…

2、…，.................................................................……293.2.6質粒的小量制備(改良的堿裂解法)................................................................……293.2.7質粒的大量制備(堿裂解法)..........................................

3、..................……，.........……293.2.8脂質體介導轉化法(Lipfectin2000，InvitrogenCp.)..............……303.2.9構建重組桿狀病毒的操作流程............................................................................……303.2.10重組穿梭載體(B朗mid)的構建.，....

4、..........……，二，..…，.…，.....……，，.……，，…，........……313.2.11重組穿梭載體(Bacmid)的提取.....................................................................……犯3.2.12重組桿狀病毒獲得.............................................................

5、...……323.2.13重組桿狀病毒轉導PK.15細胞..........................................................................……323.2.14間接免疫熒光試驗(IFA)檢測目的蛋白的體外表達.....................................……323.2.巧M陽stemblot檢測目的蛋白的體外表達.................

6、............................................……323.2.16桿狀病毒介導的表達JEVE的重組毒疫苗動物試驗.....................................……333.2.17E一ELIsA方法的建立..................................................……333.2.18微量中和試驗..................

7、................................................................……，……333.2.19小鼠脾淋巴細胞的分離..................................................……，.......……，..............……343.2.20實時熒光定量PcR檢測免疫小鼠脾細胞中的IFN一相對表水平.................

8、……343.2.21IFN理的定量檢測(雙抗體夾心ELISA)........................................................……353.2.22實時熒光定量PCR檢測攻毒小鼠腦組織內JEV相對含量...........................……363.2.23統(tǒng)計學方法.......................................................

9、..............……，.....................……36第四章結果與分析..............................................................................……，二，...……374，1表達JEvE基因的DNA疫苗peE的構建.........................................................

10、........……374.1.1真核表達質粒pe一E的構建..................................，一374.1.2pe一E介導E基因在哺乳動物細胞中的表達........................................................……384.2表達JEVE蛋白的重組桿狀病毒BVG一E的構建.........................................

11、.........……，.…384.2.1轉移載體PFastG一的構建................................……，...........................................……384.2.2重組穿梭載體(baCmid一G一E)的構建................................................................……394.2.3重組桿狀

12、病毒BVG一E的獲得...........................................................................……404.2.4重組桿狀病毒BVG一E介導E蛋白在哺乳動物中的表達情況........................……414.2.5重組桿狀病毒BVG一E的純化與毒價的測定..............................................

13、......……424.3重組桿狀病毒BV右一E的小鼠免疫試驗.......................……，.........................................……434.3.1免疫小鼠的ELIsA抗體水平..............................................................................……434.3.2免疫小鼠的中和抗體水平.

14、...……，........................................……，...........................……444.3.3實時熒光定量PCR檢測免疫小鼠脾細胞中IFN斗mRNA表達......................……444.3.4ELISA法檢測免疫小鼠脾細胞分泌的IFN斗水平.............................................……4543

15、.5桿狀病毒BVG一E對致死性JEV的保護率........................................................……464.3.6實時熒光定量PCR檢測攻毒小鼠腦組織中正V含量...........……，...................……47第五章討論與結論....……，..........................................................

16、.............................................……485.1討論..................................................................................................................................……485.1.1VSVG對桿狀病毒載體的修飾.............

17、.……，.........................................……，.......……485.1.2桿狀病毒轉導哺乳動物細胞的方法....................................................................……495.1.3重組桿狀病毒誘導的免疫反應.....................................……:...........

18、...................……505.1.4重組桿狀病毒對致死性乙腦強毒的保護力........................................................……515.2結論...............................……，...........................................................................