p38絲裂原活化蛋白激酶信號通路在欖香烯誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC-7901凋亡中的作用.pdf

1、目的:
　　 1.研究不同濃度欖香烯(elemene)對人中分化胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)情況；
　　 2.研究p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)在欖香烯干預(yù)前后胃癌細(xì)胞SGC-7901中的表達(dá)變化；
　　 3.研究欖香烯對胃癌細(xì)胞SGC-7901的作用與p38MAPK信號通路的關(guān)系,探討欖香烯對胃癌細(xì)胞可能的作

2、用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.將培養(yǎng)細(xì)胞分為對照組、不同濃度欖香烯作用組(0.01 mg/mL,0.02 mg/mL,0.04 mg/mL,0.08 mg/mL,0.16 mg/mL),分別作用24、48、72 h,采用四甲基噻唑氮藍(lán)(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法檢測細(xì)胞增殖抑制情況；光鏡(Light microscope,LM)、透射電鏡(Transmission elect

3、ron microscope,TEM)和Hoechst33258染色觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變。
　　 2.以0.08 mg/mL欖香烯作用胃癌細(xì)胞SGC-79010h、2h、4h、8h、12h、24h,免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)、免疫蛋白印跡(Western blot)方法檢測各組磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表達(dá)情況。
　　

4、3.將培養(yǎng)細(xì)胞分為對照組(A組)、p38MAPK抑制劑SB203580作用組(B組)、SB203580+0.08 mg/mL欖香烯作用組(C組)、0.08 mg/mL欖香烯作用組(D組),MTT法檢測細(xì)胞增殖抑制情況,免疫組化、Western blot檢測各組p-p38MAPK表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.欖香烯對胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖抑制作用:
　　 MTT檢測顯示欖香烯能夠抑制胃癌細(xì)胞SGC-79

5、01增殖,隨著藥物濃度的增加或作用時間的延長,抑制率逐漸增加,呈現(xiàn)濃度和時間依賴性。
　　 2.欖香烯對胃癌細(xì)胞SGC-7901凋亡誘導(dǎo)情況:
　　 光鏡觀察顯示欖香烯作用后,隨著藥物濃度的增加或作用時間的延長,細(xì)胞逐漸出現(xiàn)密度減低,細(xì)胞之間間隙增大,貼壁性減弱,細(xì)胞膜邊緣毛糙,細(xì)胞質(zhì)中顆粒、空泡增多,核漿比例下降,核分裂像減少,部分細(xì)胞漂浮、死亡。透射電鏡觀察顯示欖香烯作用后,細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的凋亡形態(tài)學(xué)改變。Hoec

6、hst33258細(xì)胞染色顯示對照組細(xì)胞核為彌散均勻的熒光,而欖香烯作用組的細(xì)胞核可見致密濃染的熒光,部分細(xì)胞可見核碎裂。
　　 3.p-p38MAPK蛋白表達(dá)情況:
　　 免疫組化檢測顯示對照組中p-p38MAPK呈陰性表達(dá)；0.08mg/mL欖香烯作用4 h,p-p38MAPK呈弱陽性表達(dá)；作用8 h、12 h、24 h,p-p38MAPK均成陽性表達(dá)。Western blot檢測顯示0.08mg/mL欖香烯作用SGC

7、-7901細(xì)胞4 h后,p38MAPK通路被迅速激活,與對照組相比,升高3.72倍(0.442±0.010 vs0.119±0.010,P<0.01)。24 h內(nèi)隨著作用時間的延長,p-p38MAPK表達(dá)逐漸增加,8 h、12 h、24 h組與對照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.626±0.012,0.683±0.011,0.986±0.011 vs0.119±0.010,P<0.01)。各組之間p38MAPK蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

8、P>0.05)。
　　 4.p38MARK信號通路阻斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 MTT顯示p38MAPK抑制劑SB203580作用組(B組)細(xì)胞增殖抑制與對照組(A組)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.922±0.008 vs0.933±0.007,P>0.05)。與0.08 mg/mL欖香烯作用組(D組)比較,SB203580+0.08 mg/mL欖香烯作用組(C組)細(xì)胞增殖抑制降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.637±0.010 vs0

9、.854±0.028,P<0.01)。免疫組化顯示A組、B組、C組p-p38MAPK均呈陰性表達(dá),D組呈陽性表達(dá)。Western blot檢測顯示B組和A組比較,p-p38MAPK無明顯區(qū)別,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.213±0.008 vs0.239±0.016,P>0.05)。經(jīng)SB203580預(yù)處理30 min,C組p-p38MAPK表達(dá)較D組下降54.12％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.475±0.016 vs1.036±0.056,P<

10、0.01)。C組、D組p-p38MAPK均顯著高于A組(0.475±0.016,1.036±0.056 vs0.239±0.016,P<0.01)。而A組、B組、C組、D組各組之間p38MAPK蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.欖香烯能夠抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖、誘導(dǎo)凋亡,在一定濃度和時間范圍內(nèi),其作用呈濃度和時間依賴性；
　　 2.欖香烯抑制胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖