豬IGF1R、RasGRP1及InsR基因候選功能突變位點(diǎn)效應(yīng)研究.pdf

1、我國作為第一養(yǎng)豬大國，豬肉類產(chǎn)品占我國肉類消費(fèi)的65％左右。養(yǎng)豬業(yè)是我國畜牧業(yè)發(fā)展的重點(diǎn)，但目前我國養(yǎng)豬經(jīng)濟(jì)效益還有待改善。我國地方豬與西方豬之間經(jīng)濟(jì)性狀有著較大差異。西方豬由于長期的人工選擇使得豬的經(jīng)濟(jì)性能不斷提高，而中國地方豬由于選擇的目的不同且選擇的強(qiáng)度較弱，目前在瘦肉率、生長速度等重要的經(jīng)濟(jì)性狀上與西方豬還存在較大的差距。人工選擇的不同是中國地方豬與西方豬的經(jīng)濟(jì)性狀產(chǎn)生較大差異的原因。本研究首先利用高通量測序數(shù)據(jù)對中西方豬種的選

2、擇信號差異進(jìn)行了分析，篩選中西方豬種中受到強(qiáng)烈選擇的基因，結(jié)果顯示IGF1R、RasGRP1及InsR基因在中西方豬種中受到強(qiáng)烈選擇，然后對等位基因差異表達(dá)情況進(jìn)行了研究并進(jìn)行了位點(diǎn)保守性分析，預(yù)測出關(guān)鍵的功能調(diào)控位點(diǎn)進(jìn)行后續(xù)的分子水平研究及群體研究，以期望找到對豬進(jìn)行品種改良的關(guān)鍵分子標(biāo)記。本研究得到的主要結(jié)果如下:
　　(1)通過選擇信號分析發(fā)現(xiàn)IGF1R、RasGRP1及InsR基因在中西方豬種中受到強(qiáng)烈選擇，并通過等位基因

3、差異表達(dá)研究和物種保守性分析找到3個很可能影響基因表達(dá)的候選功能位點(diǎn)。
　　(2)凝膠遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子YY1能夠結(jié)合IGF1R基因-61K A/G多態(tài)位點(diǎn)，且對等位基因G有更強(qiáng)的結(jié)合能力。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)活性檢測證明該位點(diǎn)能夠促進(jìn)下游基因表達(dá)，且G等位基因發(fā)揮的作用更強(qiáng)。然后通過RNA干擾實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子YY1表達(dá)降低能夠抑制IGF1R的表達(dá)。
　　(3)凝膠遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)錄因子MyoD能夠結(jié)合IGF1R基

4、因Intron20 G/A多態(tài)位點(diǎn)，且對G等位基因有更強(qiáng)的結(jié)合能力。然后通過熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化后IGF1R和MyoD的表達(dá)量都著極顯著的升高。
　　(4)對IGF1R基因-61KA/G多態(tài)與杜洛克×二花臉F2群體免疫及生長性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果表明該位點(diǎn)與33日齡嗜酸性粒細(xì)胞比率極顯著關(guān)聯(lián)，與80日齡體重顯著關(guān)聯(lián)，可以作為對豬生長及免疫性狀改良的候選分子標(biāo)記。
　　(5)對IGF1R基因Intron20