鈣離子在鎘致體外培養(yǎng)大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、為探討鈣離子(Ca2+)在鎘致大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用,本研究用孕18-19d SD大鼠的胎鼠建立了大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的模型,觀察不同時(shí)期的細(xì)胞形態(tài),NSE免疫組化法鑒定細(xì)胞純度。在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加不同濃度的醋酸鎘(0、5、10、20μmol/L)以及10μmol/L細(xì)胞內(nèi)Ca2+螯合劑BAPTA-AM,使其單獨(dú)或聯(lián)合作用于細(xì)胞12h,觀察鎘對(duì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)損傷;利用MTT法測(cè)定鎘及BAPTA-AM對(duì)細(xì)胞存活率的影響;利用流式細(xì)胞儀

2、測(cè)定細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度、ROS水平、線粒體膜電位(△ψm);熒光定量PCR法測(cè)定鈣調(diào)蛋白(CaM)Mrna表達(dá);分光光度計(jì)法測(cè)定細(xì)胞膜ATPase的活力。結(jié)果表明:①神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)至第六天形態(tài)最佳、活力最強(qiáng),是用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)的最佳時(shí)期;NSE純度鑒定結(jié)果表明,培養(yǎng)至第六天的細(xì)胞純度可達(dá)95％以上。②鎘暴露引起細(xì)胞形態(tài)的變化,使胞體變小,網(wǎng)絡(luò)消失;影響細(xì)胞核的形態(tài),產(chǎn)生凋亡小體。上述變化呈現(xiàn)一定劑量—效應(yīng)關(guān)系。③鎘暴露可使細(xì)胞存

3、活率降低,BAPTA-AM聯(lián)合組與相應(yīng)染毒組比較,細(xì)胞存活率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。④細(xì)胞凋亡率隨染毒濃度的增加呈上升趨勢(shì),BAPTA-AM聯(lián)合組與相應(yīng)染毒組相比均呈下降趨勢(shì);⑤細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度隨染毒濃度的增加顯著或極顯著升高(P＜0.05或P＜0.01),BAPTA-AM聯(lián)合組與相應(yīng)染毒組相比均呈降低趨勢(shì),10μmol/L組差異極顯著(P＜0.01),20μmol/L組差異顯著(P＜0.05);⑥細(xì)胞內(nèi)ROS水平升高,隨染毒濃度的增加呈降低趨

4、勢(shì),但仍顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),BAPTA-AM聯(lián)合組與相應(yīng)染毒組比較,細(xì)胞內(nèi)ROS水平均明顯降低,其中5μmol/L組差異顯著(P＜0.05),10μmol/L組差異極顯著(P＜0.01)。⑦線粒體膜電位隨染毒濃度的增加呈降低趨勢(shì),10μmol/L組表現(xiàn)極顯著(P＜0.01),20μmol/L組差異顯著(P＜0.05),BAPTA-AM聯(lián)合組與相應(yīng)染毒組比較呈現(xiàn)升高趨勢(shì),其中20μmol/L組差異極顯著(P＜0.01);⑧細(xì)胞

5、膜ATPase活性隨染毒濃度的增加呈現(xiàn)顯著或極顯著的下降(P＜0.05或P＜0.01),與20μmol/L,染毒組相比,BAPTA-AM聯(lián)合作用組Na+-K+-ATPase活性顯著升高(P＜0.05),Ca2+-Mg2+-ATPase活性極顯著升高(P＜0.01);⑨與對(duì)照組相比,20μmol/L組CaM Mrna表達(dá)極顯著降低(P＜0.01),其余無(wú)明顯變化,BAPTA-AM聯(lián)合組與相應(yīng)染毒組比較,20μmol/L組極顯著升高(P＜0