乙型肝炎病毒干預(yù)后小鼠肝臟樹突狀細(xì)胞干擾素調(diào)節(jié)因子3表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：
　　通過觀察乙型肝炎病毒干預(yù)后小鼠肝臟樹突狀細(xì)胞干擾素調(diào)節(jié)因子3表達(dá)的變化，探討HBV持續(xù)感染分子免疫機(jī)制。
　　方法：
　　采用細(xì)胞濾網(wǎng)過濾、Percoll密度梯度離心和免疫磁珠分選法分離肝臟樹突狀細(xì)胞，并用粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子和白介素4誘導(dǎo)培養(yǎng)。將樹突狀細(xì)胞分為兩組：一組與HBV共培養(yǎng)，另一組加入等量的細(xì)胞培養(yǎng)液作為正常對照組。24h后，兩組均加入Poly I：C刺激，收集不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞和上清，留細(xì)

2、胞培養(yǎng)液作為空白對照，用western blot檢測IRF3表達(dá)，用ELISA法檢測上清中IFN-β濃度。
　　結(jié)果：
　　1.DC與HBV共培養(yǎng)前，IRF3表達(dá)弱。用poly I：C刺激DC后，IRF3表達(dá)明顯增加，呈時(shí)相性，在2-6h達(dá)到高峰。DC與HBV共培養(yǎng)后，再用poly I：C刺激，IRF3表達(dá)的時(shí)相性不明顯，未見明顯升高。DC表達(dá)IRF3的能力與病毒載量有關(guān)，高病毒載量能明顯抑制IRF3表達(dá)，病毒載量低于106

3、 copies/ml時(shí)差異不明顯。
　　2.Oh時(shí)HBV組培養(yǎng)液上清IFN-β濃度(12.38±3.71pg/ml)與正常對照組(10.83±4.11 pg/ml)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.8398，P>0.05)。PolyI：C刺激后6h，HBV組培養(yǎng)液上清IFN-β濃度(88.67±9.01 pg/ml)與正常對照組(137.68±12.28 pg/ml)相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=9.653，P＜0.01)。Poly

4、I：C刺激后24h，HBV組培養(yǎng)液上清IFN-β濃度(69.89±5.80 pg/ml)與正常對照組(72.25±8.61 pg/ml)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.6820，P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.用poly I：C刺激正常DC后，IRF3表達(dá)增加，呈時(shí)相性。
　　2.HBV干預(yù)后，用poly I：C刺激DC后，IRF3表達(dá)增加不明顯。高載量HBV能明顯抑制肝臟樹突狀細(xì)胞IRF3的表達(dá)。
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