丹參酮與三氧化二砷協(xié)同誘導(dǎo)急性早幼粒細胞白血病細胞株分化與凋亡的體外研究.pdf

1、背景：自上個世紀80年代以來，我國學(xué)者先后發(fā)現(xiàn)全反式維甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)能誘導(dǎo)急性早幼粒細胞白血病(APL)細胞分化和凋亡，極大地提高了APL的完全緩解(CR)率。但隨著廣泛的臨床應(yīng)用，兩種藥物已出現(xiàn)耐藥報道，同時其不良反應(yīng)也逐漸被人們認識，因此迫切需要開發(fā)新的高效低毒的藥物以克服APL的耐藥及毒副反應(yīng)。丹參酮ⅡA(Tanshinone, TanⅡA)為丹參的乙醚提取物，是丹參的主要有效成分，近年研究表明，Tan

2、ⅡA可以通過對腫瘤細胞的殺傷、誘導(dǎo)分化和凋亡、抑制侵襲和轉(zhuǎn)移的機制發(fā)揮抗腫瘤作用。本院對于APL患者常規(guī)會應(yīng)用到丹參這一藥物，目的是預(yù)防及治療DIC，同時使用As2O3治療APL，CR率達100％，無一例早期死亡，療效高于以往文獻報道，這一現(xiàn)象似乎提示聯(lián)合應(yīng)用TanⅡA，與As2O3有協(xié)同作用，可提高As2O3的抗腫瘤效應(yīng)，但缺乏理論依據(jù)及實驗基礎(chǔ)。
　　 目的：為評估TanⅡA與As2O3聯(lián)合應(yīng)用的效應(yīng)，觀察二藥的相互作用和相

3、互影響，并探討其誘導(dǎo)分化及凋亡的機制，期望對兩藥的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：以不同濃度的As2O3、TanⅡA單獨及聯(lián)合應(yīng)用作用于NB4細胞株作為實驗組，通過觀察細胞的生長狀況、形態(tài)學(xué)改變、MTT增殖抑制實驗測定細胞存活率，并采用流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞膜表面分化抗原(CD11b)及細胞周期分布，分析不同濃度的As2O3、TanⅡA單獨及聯(lián)合應(yīng)用對NB4細胞的增殖、分化及凋亡的影響。
　　 結(jié)果：TanⅡA

4、、As2O3均能抑制NB4細胞生長，以1.0 μmol/L As2O3作用更顯著，二者聯(lián)合應(yīng)用后的增殖抑制作用表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)；經(jīng)TanⅡA組處理后的NB4細胞，其形態(tài)改變更多顯示一定程度的成熟粒細胞的特征：細胞體積變小，核漿比例縮小，染色質(zhì)密集、結(jié)塊，胞漿呈泡沫感，可見到部分中、晚幼粒細胞，As2O3組則更多表現(xiàn)為細胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變：核染色質(zhì)固縮、核碎裂，形成凋亡小體，并經(jīng)電鏡檢查證實，兩藥聯(lián)合應(yīng)用可加強NB4細胞的凋亡形態(tài)改變；FC

5、M檢測細胞表面分化抗原，結(jié)果顯示TanⅡA的誘導(dǎo)分化能力更強，以0.5μg/ml組為著，聯(lián)合應(yīng)用As2O3可拮抗其誘導(dǎo)分化能力，相反TanⅡA則可促進As2O3對NB4細胞的誘導(dǎo)分化作用；處理后的NB4細胞G0/G1期比例增高，S期細胞比例降低，細胞增殖指數(shù)(PI)下降，兩藥聯(lián)合應(yīng)用后具有協(xié)同效應(yīng)。
　　 結(jié)論 1. TanⅡA、As2O3對NB4細胞均有增殖抑制作用，1.0 μmol/L As2O3對NB4細胞增殖抑制作用最顯

6、著，As2O3對TanⅡA的增殖抑制作用具有協(xié)同效應(yīng)，并與劑量相關(guān)，較大劑量的TanⅡA也可增強As2O3對NB4細胞的增殖抑制作用。
　　 2. TanⅡA與As2O3聯(lián)合作用于NB4細胞具有誘導(dǎo)凋亡、促進分化的雙重作用，As2O3可以促進TanⅡA對NB4細胞的誘導(dǎo)凋亡作用，拮抗其誘導(dǎo)分化能力；同時，TanⅡA亦可以促進As2O3對NB4細胞的誘導(dǎo)分化作用，對As2O3的誘導(dǎo)凋亡能力具有協(xié)同效應(yīng)。
　　 3. 小劑量