丹參酮與三氧化二砷協同誘導急性早幼粒細胞白血病細胞株分化與凋亡的體外研究.pdf

1、背景：自上個世紀80年代以來，我國學者先后發(fā)現全反式維甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)能誘導急性早幼粒細胞白血病(APL)細胞分化和凋亡，極大地提高了APL的完全緩解(CR)率。但隨著廣泛的臨床應用，兩種藥物已出現耐藥報道，同時其不良反應也逐漸被人們認識，因此迫切需要開發(fā)新的高效低毒的藥物以克服APL的耐藥及毒副反應。丹參酮ⅡA(Tanshinone, TanⅡA)為丹參的乙醚提取物，是丹參的主要有效成分，近年研究表明，Tan

2、ⅡA可以通過對腫瘤細胞的殺傷、誘導分化和凋亡、抑制侵襲和轉移的機制發(fā)揮抗腫瘤作用。本院對于APL患者常規(guī)會應用到丹參這一藥物，目的是預防及治療DIC，同時使用As2O3治療APL，CR率達100％，無一例早期死亡，療效高于以往文獻報道，這一現象似乎提示聯合應用TanⅡA，與As2O3有協同作用，可提高As2O3的抗腫瘤效應，但缺乏理論依據及實驗基礎。
　　 目的：為評估TanⅡA與As2O3聯合應用的效應，觀察二藥的相互作用和相

3、互影響，并探討其誘導分化及凋亡的機制，期望對兩藥的臨床應用提供理論依據。
　　 方法：以不同濃度的As2O3、TanⅡA單獨及聯合應用作用于NB4細胞株作為實驗組，通過觀察細胞的生長狀況、形態(tài)學改變、MTT增殖抑制實驗測定細胞存活率，并采用流式細胞術(FCM)檢測細胞膜表面分化抗原(CD11b)及細胞周期分布，分析不同濃度的As2O3、TanⅡA單獨及聯合應用對NB4細胞的增殖、分化及凋亡的影響。
　　 結果：TanⅡA

4、、As2O3均能抑制NB4細胞生長，以1.0 μmol/L As2O3作用更顯著，二者聯合應用后的增殖抑制作用表現為協同效應；經TanⅡA組處理后的NB4細胞，其形態(tài)改變更多顯示一定程度的成熟粒細胞的特征：細胞體積變小，核漿比例縮小，染色質密集、結塊，胞漿呈泡沫感，可見到部分中、晚幼粒細胞，As2O3組則更多表現為細胞凋亡的形態(tài)學改變：核染色質固縮、核碎裂，形成凋亡小體，并經電鏡檢查證實，兩藥聯合應用可加強NB4細胞的凋亡形態(tài)改變；FC

5、M檢測細胞表面分化抗原，結果顯示TanⅡA的誘導分化能力更強，以0.5μg/ml組為著，聯合應用As2O3可拮抗其誘導分化能力，相反TanⅡA則可促進As2O3對NB4細胞的誘導分化作用；處理后的NB4細胞G0/G1期比例增高，S期細胞比例降低，細胞增殖指數(PI)下降，兩藥聯合應用后具有協同效應。
　　 結論 1. TanⅡA、As2O3對NB4細胞均有增殖抑制作用，1.0 μmol/L As2O3對NB4細胞增殖抑制作用最顯

6、著，As2O3對TanⅡA的增殖抑制作用具有協同效應，并與劑量相關，較大劑量的TanⅡA也可增強As2O3對NB4細胞的增殖抑制作用。
　　 2. TanⅡA與As2O3聯合作用于NB4細胞具有誘導凋亡、促進分化的雙重作用，As2O3可以促進TanⅡA對NB4細胞的誘導凋亡作用，拮抗其誘導分化能力；同時，TanⅡA亦可以促進As2O3對NB4細胞的誘導分化作用，對As2O3的誘導凋亡能力具有協同效應。
　　 3. 小劑量