過氧化氫誘導人臍靜脈內皮細胞凋亡過程中PI3K-Akt通路與JNK-SAPK通路的變化.pdf

1、[背景]現(xiàn)代觀點認為，在胰島素抵抗導致β細胞及內皮細胞功能障礙，繼而進展為糖尿病及其晚期并發(fā)癥的病程中，以及在冠心病的發(fā)病過程中，氧化應激為共同機制。氧化應激的主要機制是胞內活性氧(ROS)產生增加，激活胞內應激敏感通路，介導細胞損傷。已知細胞內存在多種氧化應激相關的通路，包括NF-κB、p38MAPK、JNK/SAPK通路等。 細胞凋亡是能量依賴的細胞內死亡程序活化而致的細胞自殺，是由基因控制的細胞自主有序的主動死亡過程。近年

2、來研究表明，氧化應激可以導致細胞異常凋亡，許多能誘導細胞凋亡的理化因素也能導致氧化應激。細胞內與凋亡相關的應激敏感通路包括PI3K/Akt通路、JNK/SAPK通路等。其中PI3K/Akt通路為抗凋亡通路，JNK/SAPK通路為促凋亡通路。研究表明在多種細胞中PI3K/Akt通路與JNK/SAPK通路存在交互作用。 [目的]研究在氧化應激誘導血管內皮ECV304細胞凋亡過程中的早期，抗凋亡通路PI3K/Akt通路及促凋亡通路JN

3、K/SAPK通路的變化情況，及在此過程中這兩條通路的相互關系。 [方法]用PI3K通路抑制劑wortmannin(100nM)和JNK通路抑制劑SP600125(20μM)分別處理培養(yǎng)的ECV304細胞，暴露于750μM過氧化氫(H2O2)，用Westernblot方法檢測p-Akt、Akt、p-JNK、JNK含量的變化，用Hoechst染色、流式細胞儀技術及Westernblot方法測caspase3、caspase9活性來檢

4、測凋亡。 [結果]H2O2刺激后ECV304細胞發(fā)生明顯凋亡。在此過程早期，PI3K/Akt通路、JNK被顯著激活，wortmannin可抑制Akt通路的激活，使細胞凋亡比例增加，對JNK活性無明顯影響。SP600125可抑制JNK通路的激活，細胞凋亡比例減少，對Akt活性無明顯影響。 [結論]H2O2刺激可以引起ECV304細胞凋亡，此過程早期，PI3K/Akt、JNK通路被顯著激活，未發(fā)現(xiàn)這兩條通路的明顯相互關系。