攜帶HGFK1基因溶瘤腺病毒的構建及其對胃癌細胞的體外殺傷作用.pdf

1、研究背景:胃癌在亞洲地區(qū)的發(fā)生率和死亡率都很高。傳統(tǒng)胃癌患者的治療方法有手術切除、化療以及放療等等，然而進展期的胃癌患者接受傳統(tǒng)治療之后的五年生存率仍就不高。近年來，隨著分子生物學的進一步發(fā)展，胃癌的各種生物治療臨床試驗也廣泛研究。溶瘤病毒療法是利用天然或改造的病毒靶向性溶解腫瘤細胞來治療腫瘤，而抗血管生成治療則通過抗腫瘤血管生成來抑制腫瘤的生長。因此，我們設想將具有抗腫瘤細胞和抗血管生成作用的人肝細胞生長因子第一結構域(HGFK1)基

2、因與溶瘤腺病毒相結合，研究其抗胃癌作用。
　　方法:人端粒酶逆轉錄酶啟動子(hTERT)和缺氧調控元件序列(HRE)分別調控溶瘤病毒的E1a和E1b基因，基因組插入HGFK1基因，構建雙調控溶瘤腺病毒(TH-Ad-HGFK1-EGFP)，空斑計數(shù)法滴定病毒濃度;病毒分為三組:實驗A組(TH-Ad-HGFK1-EGFP)、實驗B組(TH-Ad-EGFP)和對照C組(Ad-EGFP)，分別感染胃癌細胞SGC7901和正常人成纖維細胞H

3、F;熒光顯微鏡下觀察病毒復制增殖情況，半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量法(TCID50)檢測病毒在細胞中的擴增倍數(shù);噻唑藍(MTT)法檢測病毒對胃癌細胞的殺傷抑制作用;雙重熒光染色檢測病毒對胃癌細胞的促凋亡作用。
　　結果:溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP、TH-Ad-EGFP經(jīng)測序及PCR鑒定確認構建成功，滴度都為2×1010pfu/ml;病毒擴增結果顯示:A、B組病毒在SGC7901細胞中的擴增倍數(shù)分別為1.47×104倍、1.

4、6×104倍，遠大于對照C組病毒，在HF細胞中為110倍和124倍，遠小于對照C組病毒;MTT結果顯示:當感染復數(shù)(MOI)=100時，A組病毒對SGC7901細胞72h、96h后的抑制率為(71.34±8.27)％、(74.56±1.78)％，B組為(30.58±3.83)％、(31.84±6.62)％，C組為(23.40±2.29)％、(21.18±2.32)％。A組與B組兩時間點分別比較有顯著差異(P=0.002、P=0.003)

5、，A組與C組分別比較也有顯著差異(P=0.003、P＜0.001)。A、B組病毒對HF細胞在96h后的抑制率為(18.94±0.88)％、(22.84±3.34)％，C組為(53.25±3.50)％，A、B兩組與C組分別比較有較大差異(P=0.003、P=0.001);凋亡結果顯示: A組SGC7901細胞的凋亡率為(18.66±4.04)％，遠大于其余各組。
　　結論:溶瘤腺病毒TH-Ad-HGFK1-EGFP能在胃癌細胞SGC