高遷移率族蛋白1在小鼠狼瘡性腎炎中的表達(dá).pdf

1、研究背景和目的: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是一種累及人體各個(gè)器官的自身免疫性疾病,而腎臟是SLE最容易受累的器官.狼瘡性腎炎已經(jīng)成為SLE患者致死致殘的主要原因.在眾多導(dǎo)致狼瘡性腎炎發(fā)生和發(fā)展的因素中,細(xì)胞因子是最重要的因素之一.研究表明,大量細(xì)胞因子參與了狼瘡性腎炎的免疫炎癥反應(yīng),致炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子之間失衡的程度決定了炎癥的嚴(yán)重性和范圍.高遷移率族蛋白-1(hi

2、gh mobility group box chromosomal proteinl,HMGB-1)是一種參與細(xì)胞核內(nèi)多種生物學(xué)功能的核內(nèi)蛋白,最新的研究發(fā)現(xiàn)它是一種新型的炎性細(xì)胞因子.HMGB-1能夠激活和趨化炎癥細(xì)胞,誘導(dǎo)大量細(xì)胞因子的分泌.同時(shí),HMGB-1是一種內(nèi)源性的免疫輔劑,是樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟過(guò)程和Th1細(xì)胞的極化過(guò)程中的一個(gè)調(diào)節(jié)因子,對(duì)于維持Th1和Th2細(xì)胞因子之間的平衡有著重要作用.以往的研究已經(jīng)證實(shí),新型細(xì)胞因子HM

3、GB-1和多種自身免疫性疾病相關(guān),并成為關(guān)節(jié)炎治療的靶向.本實(shí)驗(yàn)旨在明確HMGB-1是否也參與了小鼠狼瘡性腎炎的發(fā)生和發(fā)展. 實(shí)驗(yàn)材料和方法: 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)雌性MRL/lpr轉(zhuǎn)基因小鼠和年齡匹配的雌性C57BL/6J近交系小鼠.分別在6周齡、12周齡和20周齡時(shí)將小鼠麻醉后留取血清和腎臟組織標(biāo)本,進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn): 1、對(duì)腎組織進(jìn)行常規(guī)HE染色、PAS染色、Masson三色染色,免疫病理檢查(IgG+IgM和補(bǔ)體

4、C3)和超微結(jié)構(gòu)檢查,以評(píng)價(jià)小鼠腎臟病理學(xué)損害程度. 2、用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測(cè)鼠血清抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體滴度. 3、用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription-Polymerase chain reactions,RT-PCR)法檢測(cè)小鼠腎臟HMGB-1、單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)和白介素-

5、1β(IL-1 β)mRNA表達(dá)水平.4、用間接免疫熒光法對(duì)HMGB-1在小鼠腎臟中的表達(dá)進(jìn)行定位. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1、MRL/lpr小鼠血清抗dsDNA抗體的滴度隨著年齡的增加而上升,明顯高于同齡C57BL/6J小鼠. 2、隨著年齡的增加,MRL/lpr小鼠腎臟的組織病理?yè)p害加重,主要表現(xiàn)為急性和亞急性增生性腎小球腎炎.6周齡MRL/lpr小鼠未出現(xiàn)腎臟損害.12周齡出現(xiàn)少量蛋白管型,腎小球系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中

6、度增生,間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);20周齡出現(xiàn)大量蛋白管型和重度系膜細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增生,并形成新月體.而在任何年齡段的C57BL/6J小鼠中,均未發(fā)現(xiàn)其腎臟組織出現(xiàn)明顯病理學(xué)改變. 3、MRL/lpr小鼠腎臟中HMGB-1 mRNA的表達(dá)(0.853±0.110)明顯高于同齡C57BL/6J小鼠(0.731±0.103)(P<0.05),和MCP-1 mRNA的表達(dá)量成正相關(guān)(r=0.584,P<0.05). 4、MRL/lpr

7、 小鼠的腎臟中HMGB-1蛋白熒光標(biāo)記呈強(qiáng)陽(yáng)性,尤其在細(xì)胞增生明顯而肥大的腎小球呈高表達(dá);而在C57BL/6J小鼠腎臟組織中以小管表達(dá)為主,腎小球僅小部分呈微弱表達(dá).HMGB1蛋白主要位于細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞外. 5、IL-1 β mRNA在已出現(xiàn)腎臟損害的MRL/lpr小鼠腎組織中表達(dá)低于同周齡C57BL/6J小鼠. 結(jié)論: 本實(shí)驗(yàn)首次揭示了新型細(xì)胞因子HMGB-1在MRL/lpr小鼠腎臟中的異常升高且分布不同