高遷移率族蛋白B1在燒傷創(chuàng)面早期進(jìn)展中作用的實驗研究.pdf

1、目的：觀察高遷移率族蛋白B1（HMGB1）在燒傷創(chuàng)面早期進(jìn)展中的作用，并探討其可能機(jī)制。
　　方法：使用事先已準(zhǔn)備好的黃銅梳模具（四排矩形柱頭及三個間隔）制作燙傷模型，既被三個間隙（5×20mm）分割的四個矩形（10×20mm）燙傷創(chuàng)面，其中這三個間隙代表著淤血（或缺血）帶。隨機(jī)將24只SPrague-Dawley（SD）大鼠分為對照組、HMGB1干預(yù)組、BoxA（HMGB1拮抗劑）拮抗組，造模后立即將PBS、HMGB1、BoxA

2、分別皮下注射到相應(yīng)燙傷創(chuàng)面的淤血帶中。于燙傷后1、12、24、72h時間點肉眼觀察創(chuàng)面情況，拍照記錄，并取材（淤血帶）進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測：（1）肉眼觀察燙傷創(chuàng)面淤血帶壞死區(qū)域變化，并使用軟件計算壞死面積的百分比。（2）H&E、masson染色下觀察燒傷早期淤血帶組織的病理學(xué)變化，觀察不同時間點各組淤血帶組織壞死情況。（3）通過免疫組化、Western blot技術(shù)檢測缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）、CD45因子的表達(dá)情況。
　　結(jié)

3、果：（1）肉眼觀察發(fā)現(xiàn)隨著時間的發(fā)展，各組創(chuàng)面淤血帶壞死面積逐漸增加，但與對照組相比，HMGB1治療組淤血帶壞死面積相對較小，而 BoxA拮抗組壞死面積相對較大。在燙傷后24h及72h，HMGB1治療組、對照組、拮抗組淤血帶進(jìn)展為壞死的面積百分比分別為18+10％、34+8%、47+10%（HMGB1組 vs對照組，P＜0.05；BoxA組 vs對照組，P＜0.05；HMGB1組 vs BoxA組，P＜0.05）和36+12%、59+6

4、%、68+15%（HMGB1組 vs對照組，P＜0.05；BoxA組 vs對照組，P＞0.05；HMGB1組 vs BoxA組，P＜0.05）。（2）在H&E、masson染色鏡下顯示：燙傷后，隨著時間的發(fā)展，兩壞死帶殘存的上皮組織越來越少，淤血帶間隔越來越窄，逐漸趨向于合并。與對照組相比，HMGB1治療組保持著相對緩慢的壞死速度，其中拮抗組最差。經(jīng)過進(jìn)一步測量，在燙傷后24h和72h，HMGB1組、對照組、拮抗組淤血帶殘存上皮間隔分別

5、為3.10+0.25mm、2.74+0.27mm、2.35+0.30mm（HMGB1組 vs對照組，P＜0.05；BoxA組 vs對照組，P＜0.05；HMGB1組 vs BoxA組，P＜0.05）和2.62+0.33mm、1.84+0.63mm、1.56+0.66mm（HMGB1組 vs對照組，P＜0.05；BoxA組 vs對照組，P＞0.05；HMGB1組 vs BoxA組，P＜0.05）。同時我們還可以發(fā)現(xiàn)HMGB1治療組淤血帶膠

6、原變性范圍相對較窄，殘留毛囊、汗腺增多，血管栓塞減輕。（3）各時間點 HMGB1組與對照組相比，淤血帶中 HIF-1α因子的表達(dá)明顯增強(qiáng)；拮抗組 HIF-1α因子的表達(dá)水平，則表現(xiàn)出降低的趨勢。同時參照對照組，應(yīng)用HMGB1治療可在多個時間點促進(jìn)淤血帶中CD45蛋白和CD45陽性細(xì)胞的表達(dá)，抑制HMGB1作用則同時也明顯抑制了淤血帶中CD45蛋白和 CD45陽性細(xì)胞的表達(dá)。
　　結(jié)論：（1）HMGB1可在燒傷早期改善創(chuàng)面淤血帶組織

7、的病理學(xué)形態(tài)，降低壞死組織面積，延緩燒傷早期進(jìn)展。（2） HMGB1能促進(jìn)燒傷創(chuàng)面淤血帶中HIF-1α因子的表達(dá)，抑制HMGB1的作用也同時降低了 HIF-1α因子的表達(dá)。HMGB1很可能是通過HMGB1-HIF-1α通路來延緩燒傷進(jìn)展的。（3）在應(yīng)用HMGB1治療的過程中，還能促進(jìn)淤血帶中CD45因子的表達(dá)，促進(jìn)燒傷早期創(chuàng)面的炎癥應(yīng)答作用。拮抗HMGB1的作用，也同時抑制了CD45因子的表達(dá)。但增強(qiáng)的炎癥反應(yīng)并沒有加重?zé)齻麆?chuàng)面的進(jìn)一步