攜BDNF基因慢病毒轉(zhuǎn)染ADSCs體外研究.pdf

1、腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）是一類具有神經(jīng)調(diào)控能力的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞存活及生長(zhǎng)發(fā)育起促進(jìn)作用；并且其人體內(nèi)含量最高，受體分布最廣，同時(shí)能促進(jìn)其他神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的釋放，增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞的生存能力。但是，目前應(yīng)用BDNF治療疾病存在限制：BDNF無(wú)法透過(guò)血腦或血眼屏障，因此全身給藥后難以到達(dá)病變位置；而且其半衰期短，即使局部注射，也需反復(fù)注射。因此合適的傳遞載體是突破BDNF治療限制的關(guān)鍵。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）屬成體多能干細(xì)胞

2、的一種，具有來(lái)源豐富、易于提取、無(wú)倫理道德問(wèn)題及多向分化潛能等優(yōu)點(diǎn)。研究表明ADSCs易于外源目的基因的轉(zhuǎn)入，兼其向損傷部位定向遷移的特性，是.一種良好的傳遞載體。而且ADSCs的干細(xì)胞特性對(duì)疾病治療起協(xié)同作用。因此本課題構(gòu)建了持續(xù)表達(dá)外源BDNF基因的ADSCs細(xì)胞系，實(shí)現(xiàn)BDNF基因的持續(xù)表達(dá)，研究對(duì)疾病治療的作用機(jī)制。
　　本課題采用膠原蛋白酶消化法，將獲得的ADSCs分離純化并進(jìn)行其增殖、表面標(biāo)志的鑒定及成脂成骨能力測(cè)試。

3、ADSCs為長(zhǎng)梭形細(xì)胞，貼壁旋渦式生長(zhǎng)，具有多向分化潛能。表面標(biāo)志鑒定結(jié)果表明其干細(xì)胞表面標(biāo)志陽(yáng)性表達(dá)，而陰性表達(dá)造血、吞噬和上皮表面標(biāo)記物等，符合間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定標(biāo)準(zhǔn)。用攜帶增強(qiáng)綠色熒光蛋白（EGFP）基因和新霉素（Neo）基因?yàn)楹Y選因子的外源BDNF基因的重組慢病毒轉(zhuǎn)染ADSCs,通過(guò)熒光篩選和G418藥物篩選，得到穩(wěn)定細(xì)胞株BDNF-ADSCs。流式測(cè)試、多向分化能力鑒定及菌落形成單位分析結(jié)果表明，BDNF轉(zhuǎn)入未改變其干細(xì)胞特性及