抗體導(dǎo)向的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)自殺基因治療肺癌的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本課題以非小細(xì)胞肺癌為研究對(duì)象,觀察抗粘蛋白-1(mucin-1)單鏈抗體(anti-MUC-scFv)介導(dǎo)的非復(fù)制型慢病毒載體對(duì)MUC-1陽(yáng)性肺癌細(xì)胞的特異性基因轉(zhuǎn)移及以此建立的CD/5-FC、TK/GCV雙自殺基因系統(tǒng)對(duì)肺癌體外的高效、靶向性殺傷作用.主要研究思路如下:1.構(gòu)建重組質(zhì)粒pMTCG:利用基因重組技術(shù)將anti-MUC-scFv基因構(gòu)建到病毒的包膜質(zhì)粒pCMV.VSVG.GFP上形成重組質(zhì)粒pMTCG.資料證明<'[48

2、]>,這種重組后的包膜質(zhì)粒不會(huì)影響GFP及抗MUC-1基因的表達(dá),包裝后的慢病毒顆粒既能表達(dá)GFP蛋白又能表達(dá)抗MUC-1抗體,因而既能增加目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的靶向性,又有利于篩選.2.構(gòu)建重組的目的基因轉(zhuǎn)移載體pHR'CS CD-TK:將CD-TK雙自殺基因構(gòu)建到目的基因轉(zhuǎn)移載體pHR'CS上,形成重組的目的基因穿梭載體pHR'CS CD-TK,增加對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用.3.慢病毒的包裝:利用磷酸鈣沉淀法將重組的目的基因轉(zhuǎn)移載體、重組的包膜

3、質(zhì)粒及包裝質(zhì)粒,共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞進(jìn)行病毒的包裝.通過(guò)293T細(xì)胞包裝出的慢病毒顆?？梢酝ㄟ^(guò)病毒外殼上的抗MUC-1抗體和表達(dá)MUC-1抗原的靶細(xì)胞特異性結(jié)合,從而使病毒的感染具有靶向性,同時(shí)降低了它與非靶細(xì)胞結(jié)合的機(jī)會(huì).慢病毒顆粒感染靶細(xì)胞后,病毒顆?；蚪M中的CD-TK基因隨之整合到靶細(xì)胞的基因組中(見(jiàn)47頁(yè).圖5,圖6).4.慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)雙自殺基因?qū)Ψ伟┘?xì)胞的體外殺傷作用:收集病毒用之感染MUC-1陽(yáng)性的肺癌細(xì)胞,繼以不同濃度的