DNA氧化損傷與食管慢性炎癥及增生病變的關(guān)系研究.pdf

1、背景和目的：
　　食管癌(esophagealcarcinoma，EC)是世界上十大常見惡性腫瘤之一，潮汕地區(qū)尤其是南澳島是食管癌高發(fā)地區(qū)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)食管癌變過程常伴隨大量的慢性炎癥，提示慢性炎癥與食管癌的發(fā)生關(guān)系密切。慢性炎癥產(chǎn)生大量的活性氧和活性氮(reactive oxygen and nitrogen species，RONS)可使DNA發(fā)生氧化損傷。DNA氧化損傷的累積可能導(dǎo)致機(jī)體正常細(xì)胞基因突變并向惡性轉(zhuǎn)化。8

2、-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy-2’-deoxy-guanosine,8-OHdG)是DNA氧化損傷反應(yīng)中最主要的產(chǎn)物，同時(shí)也是公認(rèn)的檢測DNA氧化損傷的生物學(xué)標(biāo)記。亦有研究表明，在腫瘤細(xì)胞中NF-κB信號通路可以被ROS及其產(chǎn)物激活。
　　本研究通過檢測8-OHdG在食管非癌組織中的表達(dá)，探討DNA氧化損傷與食管慢性炎癥、癌前病變的關(guān)系；用不同濃度的H2O2在體外刺激三株食管永生化上皮細(xì)胞(NE2、NE3、NE6)16 h后

3、檢測8-OHdG的表達(dá)，探討在體外活性氧對食管永生化上皮細(xì)胞的影響；通過用800μM H2O2及10ng/ml humanTNF-α分別在體外用不同時(shí)間刺激NE細(xì)胞后檢測NF-κB(p65)的表達(dá)，功能上探討H2O2誘導(dǎo)食管永生化上皮細(xì)胞DNA氧化損傷的潛在機(jī)制。
　　材料與方法：
　　材料：
　　90例內(nèi)鏡活檢食管非癌組織石蠟標(biāo)本，收集自汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理科。
　　19例尸檢食管組織石蠟標(biāo)本，收集自汕頭大學(xué)司法

4、鑒定中心。
　　3株食管永生化上皮細(xì)胞系(NE2、NE3、NE6)，由香港大學(xué)曹世華教授惠贈(zèng)。
　　方法：
　　1、HE染色：觀察食管非癌標(biāo)本的上皮增生類型，炎癥細(xì)胞浸潤程度情況。
　　2、免疫組化：采用Envision兩步法檢測8-OHdG在食管非癌標(biāo)本的表達(dá)。
　　3、細(xì)胞培養(yǎng)：利用H2O2、hTNF-α處理食管永生化上皮細(xì)胞。
　　4、免疫熒光：檢測食管永生化上皮細(xì)胞在H2O2處理前后8-OHd

5、G的表達(dá)；H2O2、hTNF-α處理前后NF-κB(p65)的表達(dá)。
　　5、利用MTT檢測H2O2處理食管永生化上皮細(xì)胞的細(xì)胞活性。
　　6、圖像采集：使用Leica DM2500及OLYMPUS BX43顯微鏡和IM50及cellSens Entry圖像采集系統(tǒng)對染色結(jié)果進(jìn)行拍照分析。
　　7、統(tǒng)計(jì)分析：利用SPSS19.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用了等級相關(guān)分析、單因素方差分析等方法。論文圖運(yùn)用GraphPad

6、 Prism5制作。
　　研究結(jié)果：
　　1、炎癥等級與食管粘膜上皮增生之間存在正相關(guān)(P<0.01)，Spearman相關(guān)系數(shù)rs=0.371。
　　2、隨著炎癥程度增加，8-OHdG的表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P<0.05)。
　　3、食管黏膜從正常到增生的過程，8-OHdG的胞核表達(dá)逐漸增強(qiáng)(P<0.01)，且其表達(dá)與食管上皮增生等級成正相關(guān)，rs=0.486。
　　4、3株食管永生化上皮細(xì)胞活性隨著H2O2處理

7、濃度增加而降低。
　　5、400μM雙氧水處理食管永生化上皮細(xì)胞16h，8-OHdG開始出現(xiàn)胞核表達(dá)。
　　6、800μM雙氧水處理NE2細(xì)胞8h，NF-κB(p65)開始出現(xiàn)胞核表達(dá)。
　　7、10ng/mlhTNF-α處理NE2細(xì)胞10min，NF-κB(p65)開始出現(xiàn)胞核表達(dá)。
　　研究結(jié)論：
　　1、炎癥越重，DNA氧化損傷越重，食管上皮增生級別越高。
　　2、H2O2可誘導(dǎo)食管永生化上皮細(xì)