Apelin-13誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞自噬中ERK1-2及Beclin1表達(dá)的研究的影響.pdf

1、目的： Apelin-13處理肝癌HepG2細(xì)胞，對(duì)ERK1/2、pERK1/2及Beclin1表達(dá)的影響，探討激活肝癌HepG2細(xì)胞中的ERK1/2信號(hào)途徑對(duì)自噬基因Beclin1表達(dá)的影響。
　　方法：
　　1.HepG2細(xì)胞培養(yǎng)及分組：培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株HepG2，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為Apelin-13組及PD98059組兩大組，其中Apelin-13組中分別為：對(duì)照組（10％FBS）、0.0001μm

2、ol/L組、0.001μmol/L組、0.01μmol/L組、0.1μmol/L組。PD98059組中分別為：對(duì)照組（10%FBS）、Apelin-13（0.1μmol/L）組、Apelin-13（0.1μmol/L）+PD98059（10μmol/L）、PD98059（10μmol/L）組、DMSO(溶媒)組。
　　2.Western blot法：檢測Apelin-13、ERK1/2抑制劑PD98095分別處理肝癌HepG2細(xì)胞

3、后對(duì)ERK1/2的磷酸化改變及Beclin1的蛋白表達(dá)。
　　3.RT-PCR法：檢測Apelin-13、ERK1/2抑制劑PD98095分別處理肝癌HepG2細(xì)胞后對(duì)Beclin1的mRNA表達(dá)。
　　4.MDC熒光染色法：熒光倒置電子顯微鏡觀察不同處理?xiàng)l件下的肝癌HepG2細(xì)胞的自噬小體的生成情況。
　　結(jié)果：
　　1.用Apelin-13在0μmol/L、0.0001μmol/L、0.001μmol/L、0

4、.01μmol/L、0.1μmol/L五種濃度處理肝癌HepG2細(xì)胞24h后，pERK1/2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是：0.445±0.021,0.764±0.013,0.857±0.018,0.906±0.072,1.019±0.041；Beclin1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是：0.354±0.010、0.734±0.017、1.080±0.068、1.092±0.014、1.168±0.024；Beclin1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別是：0

5、.466±0.095、0.737±0.038、1.246±0.038、1.370±0.039、1.522±0.034；以上結(jié)果中實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，且實(shí)驗(yàn)組兩兩比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；Apelin-13對(duì)ERK1/2的表達(dá)無明顯影響。隨著Apelin-13濃度的升高，肝癌HepG2細(xì)胞中被MDC染色的呈現(xiàn)藍(lán)綠色熒光顆粒的自噬小體越多。
　　2.Apelin-13處理肝癌HepG2細(xì)胞后加入

6、ERK1/2抑制劑PD98059處理肝癌HepG2細(xì)胞后，pERK1/2蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是：1.169±0.010、1.511±0.044、1.1435±0.041、0.955±0.023、1.087±0.053；Beclin1蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別是：1.009±0.045、1.590±0.010、1.155±0.039、0.889±0.024、1.141±0.018；Beclin1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別是:1.068±0.05

7、6、1.582±0.017、1.132±0.028、0.917±0.023、1.133±0.008。以上結(jié)果中Apelin-13(0.1μmol/L)組和PD98059(10μmol/L)組之間且與其他組別比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，Control組、Apelin-13(0.1μmol/L)+PD98059(10μmol/L)組、DMSO溶媒組三組之間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。而隨著抑制劑PD98059加入后，肝癌He