自身免疫性肝炎發(fā)病機制研究及TNF-α拮抗劑治療初探.pdf

1、第一部分:C57BL/6小鼠自身免疫性肝炎模型的建立與鑒定
　　 目的:建立自身免疫性肝炎的動物模型，在此基礎上探討AIH的發(fā)病機制及新藥療效。
　　 方法:以同種系肝抗原(S-100)和完全氟氏佐劑兩次腹腔注射免疫C57BL/6小鼠建立AIH的動物模型，正常對照組采用同劑量的PBS緩沖液，并于免疫后第4周末處死小鼠，檢測血清轉氨酶水平，自身抗體ANA和SMA以及肝組織病理檢查，并與正常對照組進行比較。
　　 結

2、果:病理模型組小鼠一般狀況差，體重增長不明顯(p=0.000)，免疫后第4周檢測血清肝臟轉氨酶，發(fā)現ALT和AST較正常組明顯升高(ALT:47.63±7.45v.s19.95±0.99，p=0.001；AST:248.37±21.25v.s.93.00±16.61，p=0.000)，部分小鼠血清中出現ANA陽性，陽性率為26.7％，未檢出SMA陽性，肝組織病理學檢測可見匯管區(qū)大量炎癥性細胞浸潤，以淋巴細胞和漿細胞為主，肝細胞可見點片狀

3、壞死。
　　 結論:以同種系肝抗原和完全氟氏佐劑兩次腹腔注射免疫C57BL/6小鼠建立的實驗性自身免疫性肝炎動物模型，免疫后第4周即出現人類AIH的實驗室和病理特點，表明建模成功。
　　 第二部分:PD-1/PD-L1，L2在自身免疫性肝炎發(fā)病中的作用研究
　　 目的:研究PD-1(programmed death-1)/PD-L1、L2(programmed death-1ligand1、2)在自身免疫性肝炎(

4、AIH)發(fā)病及炎癥進展中的作用。
　　 方法:建立AIH的C57BL/6小鼠動物模型，應用RT-PCR的方法檢測小鼠肝臟中PD-1、PD-L1、L2的表達水平，同時檢測小鼠脾臟中IFN-γ、TNF-α及IL-4等細胞因子的表達水平，并與正常對照組進行比較。
　　 結果:PD-1、PD-L1、PD-L2在AIH動物模型組中的表達水平均明顯高于正常對照組(p<0.05)，IFN-γ、TNF-α及IL-4的表達水平亦明顯升高(

5、p<0.05)，并且PD-L1的表達與IFN-γ(r=0.289，P<0.05)呈正相關，而PD-L2與IL-4(r=0.378，P<0.01)及IFN-γ(r=0.261，P<0.05)之間均存在相關性。PD-L1、PD-L2與TNF-α之間無相關性。
　　 結論:PD-1/PD-L1、L2在AIH動物模型肝臟中的表達水平明顯增高，并與增高的IFN-γ及IL-4之間存在相關性，推測PD-1及其配體在AIH發(fā)病及其病情進展中發(fā)揮

6、一定的作用。
　　 第三部分:腫瘤壞死因子拮抗劑治療AIH的初步研究
　　 目的:應用腫瘤壞死因子α拮抗劑對自身免疫性肝炎C57BU6小鼠模型進行干預，初步探索腫瘤壞死因子拮抗劑對于自身免疫性肝炎的療效。
　　 方法:建立AIH的C57BL/6小鼠動物模型，應用腫瘤壞死因子α拮抗劑--益賽普0.1mg/0.2mg分別于第一次免疫后2周和4周時皮下注射，2次/周×4周，檢測血清肝臟轉氨酶水平，肝組織病理學檢測，RT

7、-PCR方法檢測藥物處理組脾臟TNF-α，肝臟中PD-1、PD-L1、L2及TRAF-1和TRAF-2基因表達水平的變化，并與病理對照組和正常對照組之間進行比較。
　　 結果:應用益賽普后，血清肝臟轉氨酶水平呈下降趨勢，但經統計學分析，并無顯著性差異(p>0.05)；肝組織病理檢測結果顯示肝組織炎癥在用藥后有所改善；肝臟PD-1表達水平較病理對照組明顯下降(p-0.000)，而PD-L1，L2無明顯變化。肝臟TNF-α表達水平在

8、用藥后明顯降低(p=0.019)。與正常對照組相比，病理對照組TRAF-1表達水平升高，但無統計學意義(p-0.422)，TRAF-2基因表達水平反而明顯降低(p=0.007)；應用益賽普治療后，TRAF-1的表達上調，與病理對照組相比無顯著性差異(p=0.422)，而TRAF-2基因表達水平明顯升高(p=0.015)。TRAF-2與TNF-α之間存在著正相關性(r=0.261，p=0.044)。
　　 結論:TNF-α、TRA