低功率高能聚焦超聲對胰腺癌移植瘤凋亡和基因表達(dá)影響的初步研究.pdf

1、研究目的：
　　評測低功率高強(qiáng)度聚焦超聲(high intensity focused ultra-sound，HIFU)治療人胰腺癌YY-1移植瘤的療效、安全性，探討低功率HIFU對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制，以期為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1.BALB/c nu裸小鼠30只，隨機(jī)分為低功率組、高功率組、對照組，每組10只。建立人胰腺癌YY-1移植瘤裸鼠模型，并行HIFU輻照治療，治療期間觀察腫瘤體

2、積變化、腫瘤生長速率，記錄不良反應(yīng);各組分別于第7天、第14天收集腫瘤標(biāo)本，Western blot方法分析Bax、Bcl-2表達(dá)情況，TUNEL法檢測各組腫瘤細(xì)胞凋亡率。
　　2.治療第7天分別收集低劑量組及對照組腫瘤組織，通過Agilent人類基因表達(dá)譜芯片檢測差異性基因表達(dá)。通過實(shí)時定量PCR(Quantitative Real time PCR)對篩選出的差異性基因進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　1.治療后，低功率

3、組、高功率組的腫瘤體積均小于對照組(P＜0.05)，兩組間未見顯著性差異（P＞0.05）;在第3天、第7天、第14天，低功率組、高功率組腫瘤生長速率明顯低于對照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.001);兩組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。與低功率組比較，高功率組不良反應(yīng)增多，主要為皮膚燒傷和通道組織損傷(P＜0.05);
　　2.治療后第7天，與對照組比較，低功率組、高功率組Bax均表達(dá)上調(diào)，Bcl-2表達(dá)均下調(diào)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（

4、P＜0.05）;治療后第14天，與對照組比較，低功率組、高功率組Bax表達(dá)均進(jìn)一步上調(diào)，Bcl-2表達(dá)均進(jìn)一步下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);TUNEL結(jié)果顯示，治療后第7天、第14天，低功率組和高功率組細(xì)胞凋亡率均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，兩組間細(xì)胞凋亡率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3.表達(dá)譜芯片結(jié)果顯示，與對照組比較，低功率HIFU輻照后發(fā)生差異表達(dá)50倍以上的基因共4767個，其中上調(diào)39

5、58個，下調(diào)809個。GO分析(Gene Ontology，GO)和pathway分析結(jié)果提示，HIFU通過上調(diào)Fas、Bid、IL1-R、Apaf-1、Caspase-8、Caspase-9等關(guān)鍵基因表達(dá)，直接促進(jìn)凋亡，還通過影響p53信號通道、MAPK信號通道、PI3K-Akt信號通道等多個信號通道中的關(guān)鍵基因間接促進(jìn)腫瘤凋亡。
　　4.選取Caspase-8、Caspase-9、Fas、Bcl-xL行實(shí)時定量PCR驗(yàn)證，結(jié)果

6、顯示擴(kuò)增良好，并與表達(dá)譜芯片結(jié)果一致。
　　結(jié)論：
　　1.低功率、高功率HIFU治療胰腺癌移植瘤均有效，高功率組局部不良反應(yīng)較多;低功率HIFU在療效不差于高功率HIFU的基礎(chǔ)上，安全性更好。
　　2.HIFU可上調(diào)促凋亡基因Bax的表達(dá)，下調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，并具有時間和劑量依賴關(guān)系。
　　3.低功率、高功率HIFU均可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，兩組間腫瘤細(xì)胞凋亡率未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.低功率HI