EGCG上調(diào)老年相關(guān)SERCA2a低表達(dá)的表觀遺傳機(jī)理研究.pdf

1、目的：
　　心臟舒張功能障礙是老年人群中常見(jiàn)的心血管疾病，而SERCA2a在老年心臟中表達(dá)降低，與其密切相關(guān)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，ATP2a2基因的表達(dá)受到組蛋白乙酰化修飾的調(diào)控，而 EGCG（表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯）能顯著影響組蛋白乙?；剑{(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。因此，本研究采用EGCG作為干預(yù)方式，探討EGCG對(duì)老年小鼠心臟SERCA2a的表達(dá)及其對(duì)心臟組織形態(tài)學(xué)的影響，并探索其內(nèi)在機(jī)理。
　　方法：
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2、月齡雄性老年小鼠隨機(jī)分為EGCG＋老年組、DMSO＋老年組及未處理的老年組，3月齡雄性成年小鼠為青年組；EGCG＋老年組小鼠腹腔注射EGCG（50mg/kg/d），DMSO＋老年組小鼠腹腔注射與溶解EGCG等劑量的DMSO，干預(yù)8周，收集心臟組織。并做如下檢測(cè)：
　　1、 RT-PCR技術(shù)檢測(cè)各組小鼠心臟 ATP2a2、HDAC1等基因mRNA的表達(dá)水平；
　　2、 Western blot技術(shù)檢測(cè)各組小鼠心臟SERCA2a

3、蛋白的表達(dá)水平；
　　3、 ChIP-Q-PCR技術(shù)檢測(cè) ATP2a2啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白 H3及H3K9、H3K4、H3K27乙酰化水平，組蛋白去乙酰化酶HDAC1的結(jié)合水平，以及核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4、Mef2c與ATP2a2啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合水平；
　　4、取 EGCG＋老年組及老年組小鼠心臟組織，利用透射電鏡觀察心臟的超微結(jié)構(gòu)，并采用Masson染色觀察心肌的纖維化程度，TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡水平。
　　結(jié)

4、果：
　　1、 SERCA2a在轉(zhuǎn)錄和蛋白水平，EGCG+老年組及青年組顯著高于DMSO+老年組及老年組（P＜0.05）；
　　2、與DMSO+老年組及老年組比較，EGCG+老年組HDAC1 mRNA表達(dá)水平及其與ATP2a2基因啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合量顯著降低(P＜0.05)；
　　3、 EGCG+老年組ATP2a2基因啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白H3及H3K9乙?；斤@著高于DMSO+老年組及老年組（P＜0.05）；而H3K4乙酰

5、化水平在各組間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；青年組啟動(dòng)子區(qū)H3K27的乙?；礁哂谄溆嗳M（P＜0.05），而這三組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；
　　4、 GATA4、Mef2c與ATP2a2基因啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合量在EGCG+老年組及青年組高于DMSO+老年組及老年組(P＜0.05)；5、老年組小鼠心肌組織出現(xiàn)肌絲溶解破壞，心肌細(xì)胞間膠原纖維增多，心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量增加，而EGCG+老年組小鼠心肌組織肌絲溶解破壞、膠原纖