短期β2-AR阻滯劑ICI118551對(duì)大鼠肌漿網(wǎng)SERCA2a及心功能的影響.pdf

1、目的：本文旨在觀察選擇性β2-腎上腺素受體(β2-adrenoceptor，β2-AR)拮抗劑ICI118551對(duì)正常及心衰大鼠心肌細(xì)胞收縮功能的影響，測(cè)定B2-AR、Gi/Gs、SERCA2a蛋白表達(dá)，探討選擇性β2-AR拮抗劑在正常及心衰心肌細(xì)胞作用的分子機(jī)制。
　　方法：通過腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)制作大鼠慢性心衰模型，并采用膠原酶消化法分離心肌細(xì)胞。正常大鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)分為正?？瞻捉M(Nor)、正常+ICI11855150nM組(N

2、or+ICI50nM)、正常+ICI1185513uM組(Nor+ICI3uM)；心衰大鼠模型分為假手術(shù)組(Sham)、心衰空白組(HF)、心衰+ICI11855150nM組(HF+ICI50nM)、心衰+ICI1185513uM組(HF+ICI3uM)，均培養(yǎng)48h。采用Western blotting檢測(cè)心肌細(xì)胞β2-AR蛋白及心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(SERCA2a)蛋白表達(dá)水平的含量，利用免疫沉淀檢測(cè)各組Gi/Gs蛋白表

3、達(dá)水平，利用單細(xì)胞收縮動(dòng)態(tài)邊緣檢測(cè)系統(tǒng)(IonOptix)測(cè)定心肌細(xì)胞收縮功能的改變。
　　結(jié)果：與Nor組相比，Nor+ICI50nM組、Nor+ICI3uM組心肌細(xì)胞存活率、心肌細(xì)胞基礎(chǔ)收縮百分比、β2-AR、Gi/Gs、SERCA2a蛋白表達(dá)均無顯著差異(P>0.05)。與Sham組相比，心衰心肌細(xì)胞存活率明顯下降(P<0.05)；與HF組相比，HF+ICI50nM、HF+ICI3uM組心衰心肌細(xì)胞存活率無明顯改變。與Sha

4、m組相比，HF、HF+ICI50nM、HF+ICI3uM心肌細(xì)胞Gi蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)，Gs蛋白表達(dá)下降(P<0.05)，SERCA2a蛋白表達(dá)水平下降(P<0.05)，β2-AR蛋白表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。與HF組相比，HF+ICI50nM組心肌細(xì)胞Gi蛋白表達(dá)水平升高(P<0.05)，SERCA2a蛋白表達(dá)水平下降(P<0.05)；HF+ICI3uM組心肌細(xì)胞Gi蛋白表達(dá)水平明顯升高(P<0.01)，SERCA

5、2a蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.01)。各心衰心肌細(xì)胞組間β2-AR、Gs蛋白表達(dá)無明顯差異(P>0.05)。與Sham組相比，HF、HF+ICI50nM心肌細(xì)胞基礎(chǔ)收縮百分比明顯下降(P<0.01)，最大收縮幅度百分比下降(P<0.05)，HF+ICI3uM組基礎(chǔ)收縮幅度百分比下降更明顯(P<0.01)。與HF組相比，HF+ICI50nM組最大收縮幅度百分比下降(P<0.05)，同時(shí)HF+ICI3uM組最大收縮幅度百分比也下降(P<

6、0.05)。與HF+ICI50nM組相比，HF+ICI3uM組心肌細(xì)胞基礎(chǔ)收縮百分比明顯降低(P<0.05)。在Ca2+和異丙腎上腺素(isoprenaline，ISO)刺激下，HF+ICI50nM、HF+ICI3uM組心肌細(xì)胞最大收縮幅度百分比均低于HF組(P<0.05)，且HF+ICI3uM組收縮百分比下降更明顯。與Sham組相比，HF、HF+ICI50nM達(dá)到峰值收縮時(shí)間(TTP)及心肌細(xì)胞舒張50％時(shí)間(time-to-50％r

7、elaxation，R50)明顯縮短(P<0.05)HF+ICI3uM組也明顯縮短(P<0.01)。各組間舒張90％時(shí)間(time-to-90％relaxation，R90)無明顯差異。與HF組相比，HF+ICI50nM及HF+ICI3uM組達(dá)到峰值收縮時(shí)間(TTP)亦明顯縮短(P<0.05)。心衰組間心肌細(xì)胞R50和R90均無明顯差異。
　　結(jié)論：1.心衰大鼠心肌細(xì)胞成活率降低，ICI118551對(duì)正常及心衰大鼠心肌細(xì)胞存活率無

8、明顯影響。
　　2.心衰大鼠心肌細(xì)胞β2-AR蛋白表達(dá)無明顯改變、Gs蛋白表達(dá)下降、Gi蛋白表達(dá)上調(diào)，SERCA2a蛋白表達(dá)下降。
　　3.選擇性β2-AR拮抗劑ICI118551對(duì)正常心肌細(xì)胞的收縮功能及蛋白表達(dá)均無明顯影響，對(duì)心衰心肌細(xì)胞的有負(fù)性肌力作用，其可能與Gi蛋白有關(guān)，可能通過提高Gi蛋白表達(dá)，降低SERCA2a蛋白表達(dá)來降低心衰心肌細(xì)胞的收縮功能，且ICI118551作為反向激動(dòng)劑時(shí)對(duì)心衰心肌細(xì)胞具有更強(qiáng)的負(fù)性