睪酮對心力衰竭雄性大鼠心肌組織Fas和SERCA2a轉(zhuǎn)錄水平的影響.pdf

1、背景和目的心力衰竭是在世界范圍內(nèi)對人類健康構(gòu)成重大威脅的一種疾病,是常見,耗資大,致殘和致死率高的病癥,累及2﹪的成年人.在Framinghaam心臟研究中發(fā)現(xiàn),診斷為慢性心力衰竭(chronic heart failur,CHF)后,男性患者的中位數(shù)存活時(shí)間為1.7年,而女性為3.2年,男女患者的1年存活率分別為57﹪和64﹪;事實(shí)上,CHF患者3年內(nèi)的死亡機(jī)率比胸部癌癥患者高3倍之多,CHF的預(yù)后比大多數(shù)癌癥更差. 心力衰竭

2、是各種心臟疾病導(dǎo)致心功能不全的一種綜合征,其中冠心病 (cornary artery diseas,CAD)已經(jīng)成為引起CHF的第一原因,占心力衰竭患者的54﹪.事實(shí)上,CAD是包括中國在內(nèi)的世界范圍引起CHF的共同原因.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為:CHF是"心血管事件鏈"的終端環(huán)節(jié),不僅引起血流動(dòng)力學(xué)的改變,而且引起神經(jīng)內(nèi)分泌及細(xì)胞因子的變化,形成惡性循環(huán).盡管以傳統(tǒng)的強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)張血管治療以及結(jié)合ACEI及β受體阻滯劑為代表的現(xiàn)代治療使心力

3、衰竭的預(yù)后有了很大改觀,但每年仍有大量的患者發(fā)展為終末期心力衰竭.干細(xì)胞移植給人們帶來了許多憧憬,但現(xiàn)況并不理想,心臟移植由于供體數(shù)量少,極大的限制了臨床應(yīng)用.心力衰竭已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類健康的重要心血管綜合征.為了進(jìn)一步改善心力衰竭的預(yù)后,人們正在努力尋找治療心力衰竭的新策略,其中把睪酮作為治療心力衰竭的新策略,近年得到了越來越多的關(guān)注,并取得了許多重要研究成果. 睪酮(testosterone,T)作為一種激素,對心力衰竭的

4、治療益處在于:睪酮可改善血管彈性,減少心肌缺血;升高高密度脂蛋白膽固醇,降低低密度脂蛋白膽固醇;增加抗凝血酶3和纖溶活性,增強(qiáng)骨骼肌的力量.抑制炎癥細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-6(interleukin,IL-6)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α).減輕心力衰竭患者Q-T間期離散度.使血清細(xì)胞因子水平下降.擴(kuò)張血管,降低外周血管阻力,減輕心臟后負(fù)荷,增加心臟指數(shù).睪酮可調(diào)節(jié)免疫反應(yīng),補(bǔ)充睪酮可減少前炎性

5、細(xì)胞因子TNF-α,白細(xì)胞介素-1,同時(shí)增加抗炎細(xì)胞因子IL-10. 正是基于以上研究結(jié)論,把睪酮作為治療心力衰竭的一種新策略受到了很大關(guān)注,人們進(jìn)行了一系列的睪酮替代治療實(shí)驗(yàn),并取得了許多積極的成果. 現(xiàn)在擺在學(xué)者面前的一個(gè)事實(shí)是:盡管在睪酮對心力衰竭的作用上取得了這些肯定效果,但其作用的分子機(jī)制并不清楚,也正因如此,人們對睪酮作為治療心力衰竭的新策略心存疑慮. Fas又稱APO-1,CD95,屬于腫瘤壞死因子

6、受體超家族成員,可組成或誘導(dǎo)性表達(dá)于體內(nèi)許多類型細(xì)胞表面,Fas分子胞內(nèi)含60-70個(gè)氨基酸的保守序列,與細(xì)胞死亡有關(guān),稱死亡結(jié)構(gòu)域(death domain).Fas是一類極為重要的死亡受體:與Fas配體或抗小Fas抗體結(jié)合,可誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡.心肌細(xì)胞的凋亡主要就是通過Fas介導(dǎo)這一途徑來完成的.睪酮作為生長類激素,具有抗凋亡的生理作用,可使前列腺的凋亡能力下降,引起前列腺肥大,是否對心力衰竭患者的心肌具有抗凋亡作用,現(xiàn)無定論,為準(zhǔn)確

7、了解睪酮對凋亡的影響,測定心肌組織中凋亡相關(guān)基因FAS的mRNA表達(dá)水平了解睪酮對凋亡的影響. SERCA(sarco/endoplasmic reticulum Ca<'2+> ATPase)為肌漿網(wǎng)鈣ATP酶的英文縮寫,其中SERCA2a為SERCA的一個(gè)亞單位,該亞單位主要存在于心肌組織.業(yè)已發(fā)現(xiàn):衰竭心肌膜電位依賴性鈣離子通道和肌漿網(wǎng)鈣離子釋放通道表達(dá)均下降,引起收縮期鈣峰值降低.胞漿游離鈣的清除主要通過肌漿網(wǎng)鈣ATP酶

8、(sERCA2a)對鈣的攝取完成,衰竭心肌SERCA2a表達(dá)下調(diào)可導(dǎo)致舒張期游離鈣的清除速度減退,發(fā)生舒張功能障礙,睪酮干預(yù)可以改善心力衰竭,對心衰心肌SERCA2a的影響如何?通過對這些蛋白分子的mRNA表達(dá)變化測定,從而了解睪酮改善心力衰竭的作用機(jī)制. 材料與方法 健康雄性大鼠120只,3月齡體重(290±40)g,由河南實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,隨機(jī)分為假術(shù)組(Sham組)(n=15),模型組(n=105).模型組行結(jié)扎左

9、冠脈前降支近端術(shù).術(shù)后六周行超聲檢查,以左室射血分?jǐn)?shù)<45﹪為CHF模型成功標(biāo)準(zhǔn),符合標(biāo)準(zhǔn)的CHF大鼠共44只,隨機(jī)分為心衰睪酮干預(yù)組(CHF+TU,n=22)及CHF組(n=22). 給藥方法:CHF+TU組給予TU5mg/kg/次,溶于花生油中,每2周一次深部肌肉注射(劑量根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定)連續(xù)用藥干預(yù)12周;CHF組及Sham組給予等容無菌花生油深部肌肉注射,用藥12周后處死大鼠,剝離左心室,立即置入液氮中保存?zhèn)溆眯募〗M

10、織.采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reVerse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)測定心肌組織中Fas mRNA SERCA2a mRNA相對表達(dá)量,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析.各組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析和q檢驗(yàn).檢驗(yàn)水平a=0.05. 結(jié)果 (1)與假術(shù)組比較,CHF組Fas mRNA相對表達(dá)量明顯升高(p<0.05),與心衰組比較,睪酮干

11、預(yù)組心肌組織中的Fas mRNA相對表達(dá)量明顯減低(p<0.05),但仍然明顯高于假術(shù)組(p<0.05). (2)與假術(shù)組比較,心衰組中的SERCA2amRNA相對表達(dá)量較假術(shù)組明顯減低(p<0.05),與心衰組比較,睪酮干預(yù)組心肌組織中的SERCA2a mRNA相對表達(dá)量明顯升高(p<0.05),但仍然低于假術(shù)組(P<0.05). 結(jié)論 睪酮干預(yù)使心衰心肌組織中Fas mRNA相對表達(dá)量下降,SERCA2a m