人皮膚成纖維細胞衰老過程中表觀遺傳學(xué)相關(guān)基因表達的初步研究.pdf

1、目的：探討多種表觀遺傳學(xué)相關(guān)基因在人皮膚成纖維細胞自然衰老和氧化應(yīng)激誘導(dǎo)衰老過程中的表達差異及意義。
　　 方法：提取年輕組（16歲以下）及衰老組（55歲以上）人皮膚成纖維細胞中總RNA（自然衰老模型）及亞致死量H202處理誘導(dǎo)衰老組與未處理年輕對照組人皮膚成纖維細胞總RNA（氧化應(yīng)激誘導(dǎo)衰老模型），分別通過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，利用倍比稀釋法建立表觀遺傳性相關(guān)催化酶基因EZH2、Bmi-1、JMJD3、DNMT1、MLL1和內(nèi)參

2、基因β-actin的標(biāo)準(zhǔn)曲線，選用10－4濃度梯度進行實時熒光定量PCR檢測其基因表達水平的差異。
　　 結(jié)果：在各實驗組中，PCR產(chǎn)物的濃度在(1.0×10－2)～(1.0×10－7)范圍時，上述目的基因與內(nèi)參基因均得到一條平滑的擴增曲線，模板濃度與可檢測的熒光信號的循環(huán)數(shù)之間呈負相關(guān)。在自然衰老模型和氧化應(yīng)激誘導(dǎo)衰老模型中，衰老組的EZH2、Bmi-1及DNMT1基因表達水平要顯著低于年輕組(P＜0.05)，JMJD3、ML