黃芪均一多糖分離鑒定及微生態(tài)調節(jié)作用研究.pdf

1、目的：研究黃芪多糖的分離純化及結構，并探索黃芪均一多糖的微生態(tài)調節(jié)作用。
　　方法：（1）黃芪多糖提取分離與純化：采用熱水提取乙醇沉淀法提取黃芪粗多糖，三氯乙酸法脫蛋白，脫蛋白的黃芪多糖經(jīng)膜分離（截留值為6 kDa、10 kDa、20 kDa、50 kDa、100 kDa和150 kDa）；將過膜后得到的7個組分以及未通過膜分離的黃芪多糖經(jīng)DEAE Cellulose52柱色譜分離，得各組分采用Sephadex G-100色譜柱純

2、化。（2）黃芪均一多糖結構研究：采用高效凝膠滲透色譜-蒸發(fā)光檢測法測定各部分多糖的純度和分子量；采用高效液相、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化、氣質聯(lián)用色譜法、紅外光譜和核磁共振光譜法研究黃芪均一多糖結構。（3）黃芪均一多糖形貌特征測定：通用掃描電鏡和原子力顯微鏡分析黃芪均一多糖的形貌特征。（4）黃芪均一多糖微生態(tài)調節(jié)作用研究：通過腸道菌群調節(jié)、體外抗腫瘤實驗和體外抗氧化實驗研究黃芪均一多糖微生態(tài)調節(jié)作用。
　　結果：（1）黃芪

3、通過水提醇沉得到黃芪粗多糖，黃芪粗多糖通過三氯乙酸除蛋白后得到黃芪多糖（APS），多糖提取率為4.73％。蛋白脫除率為67.5%。膜分離得到7部分不同分子量范圍的黃芪多糖（>150 kDa、100~150 kDa、50~100 kDa、20~50 kDa、10~20 kDa、6~10 kDa和<6 kDa）所占總糖比例分別58.1%、1.9%、3.2%、9.2%、2.9%、4.5%和20.2%，各部分多糖含量分別為55.1%、43.2%

4、、52.9%、54.5%、56.1%、52.3%和60.1%。經(jīng)DEAE Cellulose52和Sephadex G-100分離純化后得6個黃芪均一多糖，分別為APS-A3、APS-C2、APS-E3、APS-G1、APSⅠ和APS-Ⅱ。（2）6個黃芪均一多糖的分子量分別為1.21×106 Da、9.88×104 Da、1.59×104 Da、4.87×103 Da、1.06×104 Da和2.47×106 Da。APS-A3、APS

5、-C2、APS-E3和APS-Ⅱ是由Man、Rha、GlcA、GalA、Glc、Gal和Xyl組成，APS-G1和APS-Ⅰ是由Man、Rha、GlcA、GalA、Glc和Gal，但是6個黃芪均一多糖的摩爾比各不相同。APS-A3確定結構可能為主鏈主要由(1→6)連接的Galp構成，APS-A3中共存α和β兩種糖苷鍵，其末端殘基為Rhap和GlcpA。APS-C2確定結構可能為主鏈主要由(1→2)和(1→4)連接的Galp構成，APS-

6、C2中共存α和β兩種糖苷鍵，其末端殘基為Rhap和Glcp。APS-E3為可能存在α和β兩種糖苷鍵的酸性多糖。APS-G1確定結構可能為主鏈主要由(1→6)連接的Galp構成，APS-G1中主要存在α糖苷鍵，末端殘基為Glcp和Rhap。（3）掃描電鏡觀察APS-Ⅰ呈絲帶狀結構，APS-Ⅱ呈不規(guī)則纖維絲狀。原子力顯微鏡觀察 APS-A3單鏈高度為1.3-6.3 nm，APS-C2單鏈高度為1.9-9.0 nm。（4）APS-A3、APS