體外沖擊波對碘乙酸鈉所致大鼠骨關(guān)節(jié)炎影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　通過建立碘乙酸鈉所致的大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎動物模型，研究體外沖擊波治療碘乙酸鈉所致骨關(guān)節(jié)炎的效果，進一步揭示體外沖擊波延緩關(guān)節(jié)軟骨退變的機理。
　　方法:
　　1大鼠膝OA模型的建立及驗證:8周齡雄性Wistar大鼠20只，體重280-310g，參照文獻方法[41]進行，隨機選取其中10只大鼠，設(shè)為MIA造模組，在腹腔注射10％水合氯醛麻醉下，于左側(cè)膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射4％碘乙酸鈉溶液50ul（碘乙酸鈉1mg，溶于生理

2、鹽水50ul），右側(cè)不作處理。再隨機選取10只大鼠，設(shè)為對照組，以同法于左側(cè)注射生理鹽水。術(shù)后均給予正常飲食。標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)28天后，處死所有20只大鼠，截取其膝關(guān)節(jié)做HE染色和甲苯胺藍(lán)染色，并測試左下肢承重比(％），驗證大鼠OA模型是否成功。再購買8周齡雄性Wistar大鼠30只，體重270-310g，將這些大鼠隨機分為5組，A組:OA未治療組。B組:造模后2周行早期體外沖擊波治療組。C組:造模后4周開始體外沖擊波治療組。D組:造模后6周開

3、始體外沖擊波治療組。E組:空白對照組。A、B、C、D組在腹腔注射10％水合氯醛麻醉下，于左側(cè)膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射4％碘乙酸鈉溶液50ul（碘乙酸鈉1mg，溶于生理鹽水50ul），右側(cè)不作處理。E組以同法于左側(cè)注射生理鹽水，術(shù)后給予正常飲食。
　　2體外沖擊波干預(yù):B、C、D組大鼠腹腔注射10％水合氯醛全身麻醉，對左側(cè)脛骨上段進行體外沖擊波處理一次，沖擊波能量強度設(shè)定為1.5×105Pa，脈沖600次。
　　3采用Ⅱ型膠原C端肽(C

4、TX-Ⅱ)檢測試劑盒檢測大鼠尿液中CTX-Ⅱ的濃度(pg/ml)。
　　4組織形態(tài)學(xué)觀察和Mankin評分。處死動物之后，取大鼠膝關(guān)節(jié)在4％多聚甲醛溶液中固定，用10％乙二胺四乙酸脫鈣，每周換一次脫鈣液，共脫鈣3周。脫鈣完成后，將標(biāo)本取出包埋在石蠟中。切下冠狀部分（5μm厚）并進行蘇木精-伊紅染色（HE染色），甲苯胺藍(lán)染色，其組織學(xué)部分根據(jù)Mankin評分的方法進行評估。
　　5采用雙抗體夾心ABC-ELISA的免疫組織化學(xué)

5、方法檢測血清中基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)、環(huán)氧化物酶-2(COX-2)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)的水平。
　　結(jié)果:
　　1動物模型驗證成功;標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)4周后，處死所有20只大鼠，手術(shù)截取膝關(guān)節(jié)做甲苯胺藍(lán)染色和HE染色，可見對照組關(guān)節(jié)軟骨表面光滑，軟骨細(xì)胞層次結(jié)構(gòu)清晰，表層細(xì)胞小而扁平，向下細(xì)胞增大并呈柱狀排列，少見細(xì)胞分裂。MIA造模組則見軟骨表面不光滑，表層軟骨變薄，粗糙，軟骨

6、表面出現(xiàn)多個裂隙，可見裂隙從表面延伸向下達輻射層，裂隙中可見稀疏結(jié)締組織及松散的網(wǎng)狀連接，裂隙周圍可見脫水固縮壞死的軟骨細(xì)胞。測試左下肢承重比(％);對照組，28.54±8.69; MIA造模組，49.78±4.08。結(jié)果顯示膝關(guān)節(jié)OA大鼠模型造模成功。
　　2體外沖擊波(ESW)治療后1周開始測量，發(fā)現(xiàn)隨著體外沖擊波(ESW)治療時間的增加，B、C、D組碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠的下肢力量逐漸恢復(fù)。左下肢承重比(％):A，23.

7、08±9.37;B，45.37±3.20;C，36.45±5.45;D，29.56±7.29;E，50.62±4.08。其中B組力量恢復(fù)最好，接近正常對照組E組;D組力量恢復(fù)最差，療效并不明顯;C組力量介于B、D兩組之間，恢復(fù)程度中等。
　　3與正常對照組E組相比，實驗組A、B、C、D組大鼠尿液中CTX-Ⅱ含量均升高，其中A組（188.473±13.584 pg/m）最高;與A組相比，沖擊波干預(yù)后的實驗組B、C、D組大鼠尿液中CT

8、X-Ⅱ含量均降低。B組（73.153±9.021 pg/ml）從早期接受體外沖擊波治療，CTX-Ⅱ含量降低明顯，接近正常對照組E組(66.150±8.719 pg/ml)的含量水平。C、D組中CTX-Ⅱ含量均高于正常對照組E組和B組，且開始體外沖擊波治療最晚的D組(159.395±14.738 pg/ml)的CTX-Ⅱ水平高于C組(125.262±9.522pg/ml)。
　　4體外沖擊波治療時機的選擇不同，碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎

9、大鼠的組織形態(tài)不同。與正常對照組（E組）相比，A組、D組的Mankin評分結(jié)果顯著增加，D組骨關(guān)節(jié)炎病情較A組稍好; B組早期開始接受體外沖擊波治療，骨關(guān)節(jié)炎病情好轉(zhuǎn)，趨于正常水平;C組中期開始接受體外沖擊波治療，病情好轉(zhuǎn)，但比B組、E組嚴(yán)重。
　　5與對照組（E組）相比，碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠（A組）血清中MMP-13水平顯著增加，（78.32±2.34 ug/ml），約增加了3.5倍;早期接受體外沖擊波療法的碘乙酸鈉所致的

10、骨關(guān)節(jié)炎大鼠（B組）中MMP-13血清學(xué)水平與正常對照組相似，（20.61±1.13 ug/ml）趨于正常水平;后期陸續(xù)接受體外沖擊波療法的碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠（C組和D組）血清中MMP-13水平與正常對照組E組相比，分別約2、3倍。
　　6與對照組（E組）相比，碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠（A組）中MMP-1血清水平顯著增加(178.03±3.20 ug/ml)，增加了2.8倍;早期接受體外沖擊波療法的碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎

11、大鼠（B組）中MMP-13血清水平（72.60±1.15 ug/ml）與正常對照組的表達水平相似，趨于正常水平;后期陸續(xù)接受體外沖擊波療法的碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠(C組:116.48±2.66 ug/ml和D組:162.48±2.18 ug/ml)中MMP-1血清水平與正常對照組E組相比，分別約1.7、2.3倍。由此可見，體外沖擊波療法抑制MMP-1水平;且越早治療，MMP-1血清水平降低越顯著。后期陸續(xù)接受體外沖擊波療法的碘乙酸鈉

12、所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠（C組和D組）中MMP-13血清水平正常對照組E組相比，分別約1.6、3.1倍。
　　7與對照組（E組）相比，碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠（A組）血清中COX-2水平顯著增加;B組血清中COX-2水平趨于正常水平; C組血清約為E組2倍，D組約為E組3.2倍。
　　8與對照組（E組）相比，碘乙酸鈉所致的骨關(guān)節(jié)炎大鼠（A組）血清中IL-1水平（19.32±0.064 pg/ml）增加明顯，約為E組的3.5倍;