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文檔簡介
1、目的:研究自噬/溶酶體途徑在6-羥基多巴胺(6-OHDA)致多巴胺能神經(jīng)細胞死亡中的作用,探討自噬在帕金森病發(fā)病中的機制。 方法:采用腦立體定位黑質致密部給藥法,建立6-OHDA介導的帕金森病大鼠模型:采用6-OHDA處理人神經(jīng)母細胞瘤株SH-SY5Y細胞建立PD細胞模型。利用透射電鏡和MDC染色法觀察DA神經(jīng)細胞中自噬和溶酶體的激活,免疫熒光法和Westem Blot法檢測6-OHDA對DA神經(jīng)細胞中自噬、溶酶體和凋亡相關蛋白
2、表達的影響,以及抑制自噬和溶酶體對這些蛋白表達的影響。 結果:透射電鏡顯示,6-OHDA給藥后1.5h至24h可見大鼠黑質致密部神經(jīng)元內(nèi)溶酶體被激活,自噬小體形成,24h自噬和凋亡同時存在。MDC染色發(fā)現(xiàn)6-OHDA能誘導SH-SY5Y細胞產(chǎn)生自噬小泡。免疫熒光法顯示模型大鼠與對照組相比,cathepsin I、cathepsin B、Lampl陽性細胞增多,cathepsin L出現(xiàn)核異位表達。3-MA能增加TH陽性細胞數(shù)量,
3、顯著降低cathepsin L的表達,明顯減少NF-kB p65核轉位和TUNEL陽性細胞數(shù)。在PD細胞模型中,LC3表達量增加,Cathepsin L被激活,在細胞核內(nèi)大量表達,幾乎同一時程,NF-kB p65也大量核轉位;自噬抑制劑3-MA、溶酶體堿化試劑NH4C1能增加6-OHDA早期的細胞毒性,減輕晚期的細胞毒性。3-MA、NH<,4>C1和組織蛋白酶抑制劑Leupeptin能減少LC3表達量,Leupeptin能下調(diào)cathe
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