P2X-,2-3-受體在結狀神經(jīng)節(jié)細胞介導心肌痛傷害性信息傳遞的作用研究.pdf

1、目的: 探討P2X3,及P2X2/3受體在心肌及結狀神經(jīng)節(jié)(NG)神經(jīng)元細胞介導心肌痛傷害性信息傳遞的作用。 方法: (1)心肌缺血大鼠行為學方法觀察心肌缺血模型組、P2X3及P2X2/3受體拮抗劑A-317491干預的心肌缺血模型組和對照組三組大鼠的行為學變化。 (2)HE染色、心電圖記錄、大鼠心肌酶水平測定、心肌的原位雜交及蛋白印跡等觀察心肌缺血對大鼠心肌功能的影響。 (3)免疫組化和蛋白印跡技術了解

2、心肌缺血對心肌P2X3受體、大鼠結狀神經(jīng)節(jié)P2X2和P2X3受體蛋白表達的影響，RT—PCR和原位雜交的方法檢測心肌P2X3受體、結狀神經(jīng)節(jié)P2X2和P2X3受體mRNA表達的變化。 結果: (1)心肌缺血大鼠出現(xiàn)明顯的傷害性行為，應用A-317491后可明顯減輕心肌缺血大鼠出現(xiàn)的傷害性反應。 (2)心肌缺血對大鼠心肌的影響：①心肌的HE染色顯示心肌缺血模型組心肌呈現(xiàn)大面積結締組織增生現(xiàn)象和心肌細胞的萎縮，A-3

3、17491干預組的結締組織增生現(xiàn)象和心肌細胞的萎縮現(xiàn)象明顯減輕；②心電圖記錄顯示，心肌缺血損傷的大鼠模型的心率(264.63±32.30)明顯比對照組(361.38±29.08)慢(p＜0.05)；心肌缺血損傷的大鼠模型的心電圖ST段移位，出現(xiàn)高而尖的T波，應用A-317491后心肌缺血損傷大鼠的心率加快(從264.63±32.30到310.13±31.75)，而且A-317491還可以有效改善心肌缺血大鼠的早搏現(xiàn)象：③大鼠心肌酶水平測

4、定結果顯示，心肌缺血大鼠血清中CK(6663.967±230.793),CK-MB(3091.553±370.2849)和LDH(2469.4±147.5876)水平比對照組CK(742±41.1038，p＜0.01)，CK-MB(717.7067±89.3825，p＜0.01)和LDH(289.6667±16.4279，p＜0.01)顯著升高；A-317491可以減低心肌缺血大鼠血清中CK(2960.567±55.906，p＜0.05

5、)，CK-MB(1364.823±121.6325，p＜0.05)和LDH(907.0333±47.2300，p＜0.05)的水平。④心肌的原位雜交顯示心肌缺血組心肌P2X3受體陽性細胞灰度值(147.75±5.67)較對照組(114.75±2.12)灰度值增大(p＜0.01)，A-317491。干預后的心肌缺血大鼠組心肌P2X3受體陽性細胞灰度值(119.86±4.82)較心肌缺血組減小(p＜0.01)。⑤心肌的蛋白印跡結果顯示心肌缺

6、血組心肌P2X3受體蛋白表達(138.66±3.47)較對照組(101.38±5.62)灰度值增大(p＜0.01)，A-317491干預后的心肌缺血大鼠組心肌P2X3受體蛋白表達(112.35±2.65)較心肌缺血組減小(p＜0.01)。 (3)心肌缺血大鼠結狀神經(jīng)節(jié)P2X2及P2X3受體變化： ①免疫組化結果顯示心肌缺血組NG神經(jīng)元P2X2受體陽性細胞灰度值(113.77±5.58)較對照組(108.25±8.83)增

7、大(p＜0.05)，A-317491干預的心肌缺血組P2X2受體陽性細胞灰度值(104.26 ±6.34)較心肌缺血組減小(p＜0.05);心肌缺血組NG神經(jīng)元P2X3受體陽性細胞灰度值(134.39±9.03)較對照組(118.51±8.00)增大(p＜0.05)，A-317491干預的心肌缺血組P2X3受體陽性細胞灰度值(121.29±8.73)較心肌缺血組減小(p＜0.05)。 ②原位雜交結果顯示心肌缺血組NG神經(jīng)元P2X

8、2受體mRNA表達(153.83±9.04)較對照組(137.35 ±7.48)增大(p＜0.05)，A-317491干預的心肌缺血組P2X2受體mRNA表達(143.49±9.85)較心肌缺血組減小(p＜0.05)；心肌缺血組NG神經(jīng)元P2X3受體mRNA表達(138.07±3.57)較對照組(123.31±9.02)增大(p＜0.05)，A-317491干預的心肌缺血組P2X2受體mRNA表達(127.55±4.73)較心肌缺血組減

9、小(P＜0.05)。 ③目的條帶經(jīng)β—actin標化后的RT-PCR結果顯示心肌缺血組P2X2的mRNA表達(1.407±0.09)較對照組(1.131 ±0.04)增大(p＜0.01)，A-317491干預的心肌缺血組的表達(1.136±0.05)較心肌缺血組減小(p＜0.01)；心肌缺血組P2X3的mRNA表達(0.847±0.05)較對照組(0.583±0.02)增大(p＜0.01)，A-317491干預的心肌缺血組的mR

10、NA表達(0.666±0.04)較心肌缺血組減小(p＜0.01)。 ④蛋白印跡結果顯示心肌缺血組P2X2蛋白表達(2.13±0.09)較對照組(0.819±0.03)增大(p＜0.05)，A-317491干預的心肌缺血組的表達(1.48±0.05)較心肌缺血組減小(p＜0.05)；心肌缺血組P2X3蛋白表達(2.15±0.06)較對照組(0.90±0.04)增大(p＜0.01)；A-317491干預的心肌缺血組的表達(0.93±