黃河鯉TLR家族成員對(duì)LPS的響應(yīng)模式和TLR4a-TLR4b基因克隆及表達(dá)分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩76頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、黃河鯉(Cyprinus carpio haematopterus)是河南重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一。近年來,隨著黃河鯉高密度集約化養(yǎng)殖模式的不斷發(fā)展,其病害問題日益嚴(yán)重,給漁業(yè)生產(chǎn)帶來重大損失。因此,黃河鯉免疫和疾病防控對(duì)于黃河鯉養(yǎng)殖具有重要意義。弄清黃河鯉對(duì)病原的識(shí)別和響應(yīng)是有效防控疾病的重要內(nèi)容之一。Toll樣受體(Toll-like receptors, TLRs)作為一種重要的模式識(shí)別受體,可以特異性識(shí)別保守型的病原體相關(guān)分子模式,在

2、魚類的病原識(shí)別和啟動(dòng)機(jī)體的免疫應(yīng)答中發(fā)揮著及其重要的作用。脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分,也稱為內(nèi)毒素,是養(yǎng)殖魚類爆發(fā)細(xì)菌性疾病的主要毒力因子之一。但在黃河鯉中,模式識(shí)別受體對(duì)LPS的免疫應(yīng)答缺乏系統(tǒng)研究。因此,弄清黃河鯉TLRs對(duì)LPS的免疫響應(yīng)模式及關(guān)鍵基因TLR4a/TLR4b的分子特征及表達(dá)變化,對(duì)黃河鯉的疾病防控具有重要的理論意義和應(yīng)用價(jià)值。
  本文根據(jù)GenBan

3、k數(shù)據(jù)庫中鯉TLRs部分序列設(shè)計(jì)引物,采用RT-qPCR技術(shù)檢測(cè)鯉18種TLRs表達(dá)量,注射不同濃度(2 mg/mL、4 mg/mL和8 mg/mL)LPS后,檢測(cè)黃河鯉肝中18種TLRs在不同時(shí)間(3 h、6 h、12 h、1 d、2 d和3 d)的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,TLR1、TLR4a、TLR4b、TLR5M、TLR20和TLR22的表達(dá)量明顯上調(diào);TLR3、TLR18、TLR19和TLR25表達(dá)量下調(diào);TLR7家族成員(TLR7

4、、TLR8和TLR9)、TLR2和TLR21表達(dá)量在大多數(shù)時(shí)間點(diǎn)無明顯變化。本研究是對(duì)黃河鯉 LPS刺激后所有己知TLRs家族成員表達(dá)模式的系統(tǒng)研究,發(fā)現(xiàn)TLRs家族不同成員對(duì)LPS刺激表現(xiàn)出不同的響應(yīng)模式。
  本研究發(fā)現(xiàn)TLR4a和TLR4b對(duì)LPS應(yīng)激顯示明顯響應(yīng),為此,對(duì)TLR4a和TLR4b的分子結(jié)構(gòu)特征和對(duì)LPS響應(yīng)的表達(dá)變化進(jìn)行研究。采用RT-PCR和RACE方法,獲得黃河鯉TLR4a和TLR4b基因全長cDNA序列

5、,并對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)及同源性分析,結(jié)果顯示:①黃河鯉TLR4a cDNA全長2836 bp,包含開放閱讀框(ORF)2325 bp,編碼794個(gè)氨基酸,5’非編碼區(qū)123 bp和3’非編碼區(qū)388 bp。在線預(yù)測(cè)TLR4a蛋白相對(duì)分子量為121.5 kD,理論等電點(diǎn)為5.73;包含6個(gè)LRR結(jié)構(gòu)域,1個(gè)LRR-CT基序,1個(gè)跨膜區(qū)和1個(gè)TIR胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。②TLR4b cDNA全長序列為2897 bp,包含2466 bp的開放閱讀框,編碼

6、821個(gè)氨基酸,198 bp的5’非翻譯區(qū)和233 bp的3’非翻譯區(qū)。在線預(yù)測(cè) TLR4b蛋白相對(duì)分子量為123.1 kD,理論等電點(diǎn)為5.81;包含8個(gè)LRR結(jié)構(gòu)域,1個(gè)LRR-CT基序,1個(gè)跨膜區(qū)和1個(gè)TIR胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。③對(duì)不同魚類中氨基酸全長序列進(jìn)行同源性分析,結(jié)果表明TLR4a和TLR4b在魚類中高度保守,推測(cè)其在魚類中扮演重要的生物學(xué)功能。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明,黃河鯉TLR4a和TLR4b與斑馬魚(Danio rerio) TL

7、R4a和TLR4b親緣關(guān)系最近。
  采用半定量PCR方法檢測(cè)黃河鯉不同組織器官中TLR4a和TLR4b表達(dá)量。黃河鯉TLR4a和TLR4b在12種組織器官(肝、脾、腎、頭腎、腦、鰓、鰭、肌肉、腸道、心臟、血液和皮膚)中均可檢測(cè)到表達(dá)。TLR4a和TLR4b均是在脾和頭腎中表達(dá)量最高,血液和肌肉中表達(dá)量最低。RT-qPCR檢測(cè)3種濃度(2 mg/mL、4 mg/mL和8 mg/mLl) LPS注射后不同時(shí)間點(diǎn)(3 h、6 h、12

8、 h、1 d、2 d和3 d)黃河鯉TLR4a和TLR4b在鰓、肝、脾和頭腎中的表達(dá)量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS注射后,肝、脾和頭腎中 TLR4a和 TLR4b表達(dá)量明顯上調(diào),但是,在鰓中TLR4a和TLR4b表達(dá)量無明顯變化。在脾和頭腎中,TLR4a和TLR4b均在高濃度組(8 mg/mL)注射6 h后達(dá)到了最高值。然而,在肝中,TLR4a和TLR4b在低濃度組(2 mg/mL)上調(diào)最顯著,在6 h分別達(dá)到了對(duì)照組的28.64倍和25.39倍

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論