不同遺傳背景和生長(zhǎng)階段丹參的MSAP及相關(guān)基因分析.pdf

1、丹參（Salvia miltiorrhiza Bge.）為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，在我國(guó)使用歷史悠久，分布廣泛，不同地區(qū)丹參在形態(tài)生理特征和藥用成分上均存在差異。DNA甲基化廣泛存在于高等植物中，在環(huán)境適應(yīng)和調(diào)控植物的生長(zhǎng)發(fā)育中起著重要的作用。
　　本實(shí)驗(yàn)采用甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性(MSAP)技術(shù)，對(duì)在同一個(gè)地區(qū)栽培的具有不同遺傳背景和不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的丹參進(jìn)行DNA甲基化狀態(tài)分析，并對(duì)有DNA甲基化差異的片段進(jìn)行序列分析，以

2、了解DNA甲基化和有關(guān)基因在丹參生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控中所起的作用。同時(shí)采用HPLC法對(duì)不同遺傳背景丹參進(jìn)行了有效成分含量測(cè)定，以研究DNA甲基化與丹參有效成分積累的關(guān)系。研究結(jié)果如下：
　　1.建立了適宜MSAP分析的最佳反應(yīng)體系，對(duì)不同遺傳背景的丹參進(jìn)行了遺傳多樣性研究，UPGMA聚類結(jié)果表明，以GS值0.77為閾值，根據(jù)親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，可將不同遺傳背景丹參分為5類。
　　2.對(duì)不同遺傳背景丹參進(jìn)行MSAP分析，共得到246個(gè)甲基

3、化位點(diǎn)，其中未甲基化條帶數(shù)最多；從甲基化水平分析，來自河南商丘的丹參甲基化率最高，四川中江古店丹參的DNA甲基化率最低；表明不同遺傳背景丹參的甲基化狀態(tài)存在差異。
　　DNA甲基化差異片段測(cè)序后得到13個(gè)與這些差異相關(guān)的基因，與GIGANTEA基因、GDSL脂肪酶基因、鋅指蛋白基因、RNA聚合酶基因所編碼的氨基酸序列都有著極高的相似性，推測(cè)可能與丹參光周期及開花調(diào)節(jié)、逆境應(yīng)答及生物代謝、分化及對(duì)不良環(huán)境的適應(yīng)、丹參基因組的轉(zhuǎn)錄及初

4、級(jí)代謝有關(guān)。
　　3.對(duì)不同生長(zhǎng)發(fā)育階段丹參進(jìn)行MASP分析，共得到191個(gè)甲基化位點(diǎn)，非甲基化條帶最多；幼苗期、拔節(jié)期、盛花期丹參甲基化率逐漸降低，但到成熟期甲基化率快速升高；從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)期到生殖生長(zhǎng)時(shí)期，丹參DNA甲基化率明顯上升，以發(fā)生半甲基化為主。
　　對(duì)DNA甲基化差異片段測(cè)序，得到9個(gè)與這些差異相關(guān)的基因，與核酮糖二磷酸羧化酶基因、牻牛兒基焦磷酸合酶基因、苯丙氨酸代謝過程中的過氧化物酶基因、生長(zhǎng)素誘導(dǎo)蛋白基因所編