幾種KCNQ2-3鉀通道開放劑的光活性化合物的設(shè)計(jì)、合成、穩(wěn)定性及活性篩選研究.pdf

1、KCNQ2/3通道開放劑具有抗驚厥抗癲癇作用。前期本課題組的研究中，已經(jīng)設(shè)計(jì)并合成多個(gè)具有開放鉀離子通道的活性分子，這些藥物分子在開放該通道的程度上有明顯的差別，遺憾的是，目前尚不清楚這些活性分子的KCNQ2/3通道開放機(jī)制。
　　 本研究基于光親和標(biāo)記原理，在不更改此類活性分子活性必須基團(tuán)的前提下，對其進(jìn)行再設(shè)計(jì)，引入光活性基團(tuán)或放射性同位素，并對設(shè)計(jì)合成的目標(biāo)化合物的穩(wěn)定性進(jìn)行研究，篩選具有KCNQ2/3通道開放活性的備選化

2、合物，為后續(xù)研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 第一部分間三氟甲基苯乙酸的合成路線設(shè)計(jì)及合成
　　 目的:研究適合實(shí)驗(yàn)室合成間三氟甲基苯乙酸的路線
　　 方法:以對硝基苯乙酸為原料，經(jīng)鈀碳還原為4-氨基苯乙酸，氨基乙?；癁?-乙酰氨基苯乙酸，硝化后，得到4-乙酰氨基-3-硝基苯乙酸，酸水解生成4-氨基-3-硝基-苯乙酸，經(jīng)重氮化，次磷酸還原制備間硝基苯乙酸，經(jīng)鈀碳還原得間氨基苯乙酸，重氮化并碘代得間碘苯乙酸，最后在氮?dú)獗Ｗo(hù)

3、下于DMF中與三氟乙酸鈉反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物間三氟甲基苯乙酸。
　　 結(jié)果:以對硝基苯乙酸為原料，涉及八步反應(yīng)，合成了本研究課題重要中間體3-三氟甲基苯乙酸，產(chǎn)率為44.6％。
　　 結(jié)論:實(shí)驗(yàn)以價(jià)廉易得的對硝基苯乙酸為原料，涉及八步反應(yīng)，操作簡便，后處理簡單，是一條經(jīng)濟(jì)、簡便的實(shí)驗(yàn)室合成間三氟甲基苯乙酸的途徑。
　　 第二部分幾種KCNQ2/3鉀通道開放劑光活性化合物的設(shè)計(jì)及合成
　　 目的:設(shè)計(jì)、合成并篩

4、選活性較好的含有光活性基團(tuán)和放射性同位素的KCNQ2/3開放劑，為此類藥物的優(yōu)化及新藥的開發(fā)提供依據(jù)。
　　 方法:(1)以3，5-二硝基苯甲酸為原料，經(jīng)單硝基還原，重氮化，碘代或者疊氮基取代，最后與金剛烷胺脫水縮合生成酰胺類衍生物3-疊氮基-5-硝基苯甲酰金剛烷胺(A-1)及3-碘-5-硝基苯甲酰金剛烷胺(A-2);(2)以胡椒醛為原料，經(jīng)硝化、醛還原、芐位氯代、硝基還原、重氮化、碘代或者疊氮基取代，最后通過加布瑞爾法制備得伯

5、胺，再與金剛烷胺縮合得脲類化合物N-(3，4-亞甲二氧基-6-疊氮基-1-苯甲基)-N’-金剛烷基脲(B-1);(3)以自制間三氟甲基苯乙酸為原料通過硝化、還原、重氮化、碘代及疊氮基取代，再與環(huán)戊胺縮合反應(yīng)得酰胺類目標(biāo)衍生物3-三氟甲基-5-疊氮基苯乙酰環(huán)戊胺(C-1)，3-三氟甲基-2-疊氮基苯乙酰環(huán)戊胺（C-2），5-碘-3-三氟甲基苯乙酰環(huán)戊胺(C-3)，2-碘-3-三氟甲基苯乙酰環(huán)戊胺(C-4)。
　　 結(jié)果:本研究設(shè)計(jì)

6、并合成了7個(gè)目標(biāo)化合物，全部為新化合物，六個(gè)新化合物經(jīng)1H-NMR確證了結(jié)構(gòu)，未作1H-NMR的化合物通過與其結(jié)構(gòu)類似的化合物的MS，二級質(zhì)譜比較，確證結(jié)構(gòu)。合成的7個(gè)化合物為:
　　 結(jié)論:合成了7個(gè)具有光活性基團(tuán)或者放射性碘原子的KCNQ2/3鉀通道開放劑衍生物，7個(gè)化合物均為新化合物。
　　 第三部分合成KCNQ2/3鉀通道開放劑光活性化合物化學(xué)穩(wěn)定性和活性篩選研究
　　 目的:研究酰胺類衍生物3-疊氮基-

7、5-硝基苯甲酰金剛烷胺的化學(xué)穩(wěn)定性;篩選具有KCNQ2/3鉀通道開放活性的光活性衍生物。
　　 方法:采用HPLC確定待測化合物的最大吸收波長，并鑒定其純度;將待測化合物配置成用于高通量活性篩選的一定濃度的溶液，連續(xù)監(jiān)測數(shù)小時(shí)內(nèi)對光、溫度以及pH的敏感性;以同濃度的RTG作為陽性對照，高通量篩選合成衍生物A-1，B-1，C-1的KCNQ2/3鉀通道開放活性。
　　 結(jié)果:3-疊氮基-5-硝基苯甲酰金剛烷在配置成低濃度溶液

8、時(shí)，穩(wěn)定性好，普通光照不影響其化學(xué)結(jié)構(gòu)，37℃條件下未見結(jié)構(gòu)改變;A-1，B-1和C-1均具有KCNQ2/3開放活性。A-1的EC50隨濃度的增大而增大;相同濃度的B-1和RTG顯示相同的活性趨勢，但活性較同濃度的RTG弱;C-1的EC50不隨濃度的變化而改變。
　　 結(jié)論:3-疊氮基-5-硝基苯甲酰金剛烷在pH7.4環(huán)境中，對光、水以及溫度(37℃)穩(wěn)定;在本研究合成的光活性衍生物中，B-1可用作配體-受體綁定位點(diǎn)研究的備選化