PD-L1阻斷對慢性粒細胞白血病源性樹突狀細胞功能影響的實驗研究.pdf

1、目的:樹突狀細胞(dendritic cell，DC)因其強大的抗原遞呈功能和激活抗原特異性的CTL(cytotoxic T lymphocytes CTL)反應(yīng)，成為腫瘤生物免疫治療的重要載體。以DC為基礎(chǔ)的腫瘤疫苗在部分惡性腫瘤的治療中已顯示出良好的效果。白血病細胞來源的DC因攜帶自身腫瘤抗原在白血病免疫治療中受到關(guān)注。有研究表明，白血病來源的DC與正常DC相比，雖其免疫標記相似，但功能較弱。PD-L1(programmed dea

2、th-1 ligand-1)作為近來發(fā)現(xiàn)的B7家族新成員已證實有免疫負調(diào)節(jié)作用并參與腫瘤免疫逃逸。隨著DC的成熟PD-L1表達明顯上調(diào)，因此我們設(shè)想能否通過阻斷PD-L1在DC上的表達以增強白血病源性DC的免疫刺激功能。 方法:采集初治慢性粒細胞性白血病(CML)骨髓，分離單個核細胞(MNC)，應(yīng)用人rhGM-CSF和rhIL-4細胞因子組合先將CML-MNC誘導(dǎo)分化為不成熟DC(imDC)，再應(yīng)用TNF-α進一步使其成熟(mD

3、C)，將所得imDC和mDC分別加或不加PD-L1單抗，觀察細胞形態(tài)、流式細胞儀檢測DC免疫表型、ELISA法測定上清液中IL-12水平，MTT法檢測DC刺激自體T淋巴細胞的增殖能力。 結(jié)果:慢性粒細胞性白血病骨髓單個核細胞經(jīng)體外擴增后，具有典型的樹突狀形態(tài)特征，并經(jīng)染色體檢查證實了其慢粒源性。流式細胞儀檢測細胞表面標志，隨著DC的誘導(dǎo)分化、成熟PD-L1表達逐漸上調(diào)；經(jīng)TNF-α誘導(dǎo)的細胞CD80、CD86、CD83、HLA-

4、DR、CDla表達明顯上調(diào)(P<0.05)，上述表達不受PD-L1單抗的影響。經(jīng)PD-L1阻斷的Dc無論成熟與否其IL-12水平均明顯增加(P<0.05)，并且激發(fā)自體T淋巴細胞增殖的能力均明顯增強(P<0.05)。 結(jié)論：本實驗結(jié)果顯示，負性調(diào)節(jié)分子PD-L1隨著慢性粒細胞性白血病源性樹突狀細胞(CML-DC)成熟表達不斷升高，PD-L1單抗可對抗這一作用且不影響CML-DC的成熟。經(jīng)PD-L1阻斷后的CML-DC其IL-12