小劑量阿糖胞苷聯(lián)合Flt-3L、TPO誘導慢性粒細胞白血病細胞分化為漿細胞樣樹突狀細胞及其功能研究.pdf

1、目的：漿細胞樣樹突狀細胞(Plasmacytoid dendritic cells，pDC)在體內作為樹突狀細胞(dendritic cells，DC)的一個亞型，發(fā)揮著重要的免疫學效應，是近來研究的熱點。pDC在其不成熟的前體階段，受到病毒或CpG寡聚多氧核苷酸(CpG ODNs)刺激后能產生大量的干擾素a(interferon-a，IFN-a)，發(fā)揮非特異的免疫學效應；在通過病毒、CpG ODN刺激或CD40L、IL-3作用分化成熟

2、后，具有一定的抗原遞呈功能而獲得適應性免疫效應，是連接先天的非特異性免疫與后天獲得性免疫的橋梁。在體外，通過FLT-3L聯(lián)合TPO能夠從造血干細胞(haemopoietic stem cell，HSC)成功培養(yǎng)出pDC，為人們研究其功能提供了方便。慢性粒細胞白血病(chronic myeloid leukemia，CML)是造血干細胞的惡性增殖性疾病，患者體內存在著一系列的免疫學異常。IFN-a治療CML療效確切，能使一部分患者獲得細胞

3、遺傳學緩解及分子生物學緩解。小劑量阿糖胞苷(low dose cytosineara binoside，LD-Ara-C)聯(lián)合干擾素治療的療效明顯優(yōu)于單用干擾素治療，所以我們設想是否LD-Ara-C在患者體內有改善免疫功能異常的作用，LD-Ara-C對CML源性的pDC的分化、成熟及功能是否有影響?因此，我們用LD-Ara-C聯(lián)合FLT-3L、TPO培養(yǎng)CML源性的造血干細胞分化成為CML 性的pDC，來研究探討LD-Ara-C治療CM

4、L可能的免疫機制，為臨床治療提供理論依據(jù)。 方法：Ficoll密度梯度離心法分離初診未治的CML患者骨髓單個核細胞(bonemarrow mononuclear cell，BMMNC)，將所得細胞分別加入不同劑量Ara-C(實驗組A：5ng/mlAra-C；實驗組B：10ng/mlAra-C；實驗組C:25ng/mlAra-C；實驗組D：50ng/mlAra-c)，并以不加Ara-C為對照組，同時加入Flt-3、TPO誘導培養(yǎng)2

5、5天；倒置顯微鏡及光鏡觀察pDC形態(tài)；流式細胞儀檢測細胞表面標志(CD4，CD123，BDCA-2)；加入流感疫苗后ELISA法檢測上清液中IFN-α濃度。 結果：CML-MNC在培養(yǎng)25天后，細胞聚集成簇，體積明顯增大，胞漿豐富，具有漿細胞樣細胞的形態(tài)；瑞氏-吉姆染色光鏡下可見偏心的核，顯示漿細胞樣形態(tài)。流式細胞儀檢測表明：p D C特征性表面分子(CD4，CD123，BDCA-2)的表達，實驗組B和實驗組A明顯高于對照組，差

6、異具有顯著性(p<0.05)；其中實驗組B高于實驗組A(p<0.05)，實驗組C細胞大部分死亡，實驗組D細胞全部死亡。分泌IFN-α的量由強到弱分別為：實驗組B>實驗組A>對照組>實驗組C，差異均有顯著性(p<0.05)。 結論：LD-Ara-C聯(lián)合Flt-3、TPO可以促使CML細胞誘導分化為pDc，增強其特征性表面分子表達，提高其經流感疫苗刺激后IFN-a的產量。提示LD-Ara-C可以增加體內pDC的量、也能增加內源性IF