RhoB在慢性粒細胞白血病細胞與原始造血細胞中的功能研究.pdf

1、第一章RhoB抑制慢性粒細胞白血病細胞的生長
　　 目的:研究RhoB對慢性粒細胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)細胞增殖能力的影響并探討其細胞機制。
　　 方法:(1)用PCR方法擴增RhoB編碼區(qū)并構(gòu)建幾種RhoB脂類修飾突變體。(2)以慢病毒為載體攜帶RhoB及其突變體在CML細胞中過表達后，采用細胞生長計數(shù)以及集落生成等實驗檢測RhoB及其脂類修飾變體對CML細胞增殖能力的影響。

2、(3)采用流式細胞術(shù)分析RhoB及其脂類修飾變體對CML細胞周期進程的影響。
　　 結(jié)果:(1)過表達RhoB能抑制MEG-01細胞及CML患者CD34+細胞的增殖。(2)脂類修飾缺失的RhoBC193G不能抑制CML細胞的增殖。(3)單獨進行法尼基(F)修飾和單獨進行牻牛兒基牻牛兒基(GG)修飾的RhoB均可抑制CML細胞的增殖。(4)過表達RhoB及其單種脂類修飾變體將CML細胞阻滯于G2/M期。
　　 結(jié)論:Rho

3、B需要F或GG類型的脂類修飾抑制CML細胞的生長并將CML細胞阻滯于G2/M期。
　　 第二章過表達RhoBT19N抑制小鼠原始造血細胞的長期造血重建能力
　　 目的:研究Rhob基因?qū)π∈笤荚煅毎鲋臣伴L期造血重建中的作用，并探討其作用機制。
　　 方法:(1)利用點突變的方法，構(gòu)建Rhob基因顯性負性變體RhobT19N。(2)利用慢病毒將RhobT19N轉(zhuǎn)導(dǎo)入小鼠原始造血細胞中，采用集落生成實驗檢測體外

4、細胞增殖能力。(3)建立小鼠造血干細胞移植模型，檢測RhoBT19N對原始造血細胞短期和長期造血重建能力的影響。(4)采用流式細胞術(shù)檢測干擾RhoB活性后，原始造血細胞表面標志物c-Kit的表達。(5)分別采用Transwell實驗和α4β1或α5β1整合素介導(dǎo)的粘附實驗檢測RhoBT19N對原始造血細胞遷移和粘附能力的影響。
　　 結(jié)果:(1) RhoBT19N抑制小鼠骨髓造血干祖細胞的集落生成能力。(2) RhoB活性被干擾