RhoB在慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞與原始造血細(xì)胞中的功能研究.pdf

1、第一章RhoB抑制慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)
　　 目的:研究RhoB對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病(Chronic myeloid leukemia，CML)細(xì)胞增殖能力的影響并探討其細(xì)胞機(jī)制。
　　 方法:(1)用PCR方法擴(kuò)增RhoB編碼區(qū)并構(gòu)建幾種RhoB脂類修飾突變體。(2)以慢病毒為載體攜帶RhoB及其突變體在CML細(xì)胞中過(guò)表達(dá)后，采用細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)以及集落生成等實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RhoB及其脂類修飾變體對(duì)CML細(xì)胞增殖能力的影響。

2、(3)采用流式細(xì)胞術(shù)分析RhoB及其脂類修飾變體對(duì)CML細(xì)胞周期進(jìn)程的影響。
　　 結(jié)果:(1)過(guò)表達(dá)RhoB能抑制MEG-01細(xì)胞及CML患者CD34+細(xì)胞的增殖。(2)脂類修飾缺失的RhoBC193G不能抑制CML細(xì)胞的增殖。(3)單獨(dú)進(jìn)行法尼基(F)修飾和單獨(dú)進(jìn)行牻牛兒基牻牛兒基(GG)修飾的RhoB均可抑制CML細(xì)胞的增殖。(4)過(guò)表達(dá)RhoB及其單種脂類修飾變體將CML細(xì)胞阻滯于G2/M期。
　　 結(jié)論:Rho

3、B需要F或GG類型的脂類修飾抑制CML細(xì)胞的生長(zhǎng)并將CML細(xì)胞阻滯于G2/M期。
　　 第二章過(guò)表達(dá)RhoBT19N抑制小鼠原始造血細(xì)胞的長(zhǎng)期造血重建能力
　　 目的:研究Rhob基因?qū)π∈笤荚煅?xì)胞增殖及長(zhǎng)期造血重建中的作用，并探討其作用機(jī)制。
　　 方法:(1)利用點(diǎn)突變的方法，構(gòu)建Rhob基因顯性負(fù)性變體RhobT19N。(2)利用慢病毒將RhobT19N轉(zhuǎn)導(dǎo)入小鼠原始造血細(xì)胞中，采用集落生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)體外

4、細(xì)胞增殖能力。(3)建立小鼠造血干細(xì)胞移植模型，檢測(cè)RhoBT19N對(duì)原始造血細(xì)胞短期和長(zhǎng)期造血重建能力的影響。(4)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)干擾RhoB活性后，原始造血細(xì)胞表面標(biāo)志物c-Kit的表達(dá)。(5)分別采用Transwell實(shí)驗(yàn)和α4β1或α5β1整合素介導(dǎo)的粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RhoBT19N對(duì)原始造血細(xì)胞遷移和粘附能力的影響。
　　 結(jié)果:(1) RhoBT19N抑制小鼠骨髓造血干祖細(xì)胞的集落生成能力。(2) RhoB活性被干擾