咽部照射后中耳組織放射損傷及機(jī)體免疫狀態(tài)菌群相關(guān)性因素的研究.pdf

1、第一部分菌群相關(guān)的中耳組織病理學(xué)和機(jī)體免疫狀態(tài)研究
　　 目的:觀察機(jī)體微生物級(jí)別不同的SPF(specificpathogenfree,SPF)級(jí)大鼠和普通(CV)級(jí)大鼠對(duì)于咽鼓管粘膜病理以及機(jī)體免疫狀態(tài)的影響。
　　 方法:SPF級(jí)和CV級(jí)SD雄性大鼠各8只,作兩種大鼠的口咽菌群培養(yǎng)和鑒定;大鼠咽鼓管光鏡,掃描電鏡觀察;流式細(xì)胞儀分析(FCM)檢測(cè)大鼠外周血T淋巴細(xì)胞及CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)區(qū)別;脾臟系

2、數(shù)的比較。
　　 結(jié)果:①CV級(jí)大鼠口咽部細(xì)菌培養(yǎng)陽性率為10096,并為銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌等致病菌,SPF級(jí)大鼠口咽部細(xì)菌培養(yǎng)陽性率為25％,且為常駐菌奇異變形桿菌;②咽鼓管光鏡檢查發(fā)現(xiàn):兩種大鼠細(xì)胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)均正常,且相似,但光鏡下SPF級(jí)大鼠咽鼓管粘膜杯狀細(xì)胞數(shù)目明顯減少(P＜0.05),掃描電鏡顯示兩種大鼠纖毛形態(tài)均正常;③FCM顯示SPF級(jí)大鼠外周血CD4+淋巴細(xì)胞比例較低(P＜0.05);④脾臟系數(shù)差別

3、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但SPF級(jí)大鼠脾臟系數(shù)相對(duì)較小。結(jié)論:SPF級(jí)大鼠和CV級(jí)大鼠在口咽部細(xì)菌陽性率和種類上存在差異;兩種大鼠在光鏡和電鏡下形態(tài)基本相同,但CV級(jí)大鼠杯狀細(xì)胞相對(duì)較多說明曾經(jīng)中耳感染或慢性低毒性刺激的可能;FCM檢查和脾臟系數(shù)提示SPF級(jí)大鼠微生物刺激程度較低。
　　 第二部分中耳組織放射損傷及咽部菌群狀態(tài)與機(jī)體免疫功能相關(guān)性的研究
　　 目的:觀察SPF級(jí)大鼠和CV級(jí)大鼠在中耳鼻咽部不同劑量照射下早期中耳的組

4、織病理改變及機(jī)體免疫狀態(tài)變化,探討放射后全身免疫狀態(tài)的改變對(duì)中耳組織損傷的影響。
　　 方法:選取SPF級(jí)和CV級(jí)雄性SD大鼠各15只,每組5只。以6MX直線加速器以10Gy、20Gy、30Gy照射大鼠鼻咽區(qū)域,在放射后24-36小時(shí)進(jìn)行取材,并與第一部分研究的未照射的大鼠相比較,觀察照射后大鼠的口咽菌群改變情況;大鼠咽鼓管掃描電鏡檢查;咽鼓管粘膜ICAM-1表達(dá):放射前后大鼠外周血T淋巴細(xì)胞及CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞亞群及T

5、淋巴細(xì)胞表面ICAM-1(CD54)表達(dá)變化:統(tǒng)計(jì)學(xué)分析咽鼓管粘膜ICAM-1表達(dá)與外周血T淋巴細(xì)胞及亞群的關(guān)系。
　　 結(jié)果:①放射后SPF級(jí)大鼠口咽細(xì)菌陽性率上升,但只能檢出奇異變形桿菌,CV級(jí)大鼠細(xì)菌培養(yǎng)仍呈現(xiàn)種類多樣、致病菌多的特點(diǎn);②SPF級(jí)大鼠和CV級(jí)大鼠在放射前咽鼓管粘膜ICAM-1均未表達(dá),照射后ICAM-1表達(dá)開始上升,SPF級(jí)大鼠ICAM-1表達(dá)明顯偏弱,統(tǒng)計(jì)學(xué)組間分析無明顯差異,CV級(jí)大鼠在放射劑量較大時(shí)(

6、30Gy)ICAM-1明顯表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)組間分析差異明顯;③電離輻射在較早時(shí)期就能導(dǎo)致咽鼓管超微結(jié)構(gòu)的變化,輻射劑量是形態(tài)病理變化的重要因素,輻射劑量相同時(shí),CV級(jí)大鼠咽鼓管超微結(jié)構(gòu)損傷程度均比SPF級(jí)大鼠嚴(yán)重;④CV級(jí)大鼠在輻射后外周血T淋巴細(xì)胞總數(shù)和CD4+淋巴細(xì)胞均明顯減少,CD8+淋巴細(xì)胞增加,組間有明顯差異(P＜0.01或P＜0.05),并與輻射劑量有一定的效應(yīng)關(guān)系,同時(shí)CD4+/CD8+比值呈明顯下降趨勢(shì),組間差異明顯(P＜0

7、.01);SPF級(jí)大鼠在電離輻射后外周血T淋巴細(xì)胞總數(shù)、CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞亞群在電離輻射后無明顯下降,CD4+/CD8+比值隨劑量雖有下降,但下降趨勢(shì)比較普通大鼠程度較輕,統(tǒng)計(jì)學(xué)組間分析無明顯差異。⑤等級(jí)相關(guān)分析提示SPF級(jí)大鼠咽鼓管ICAM-1的表達(dá)與外周血CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比例無明顯相關(guān)關(guān)系。而CV級(jí)大鼠咽鼓管ICAM-1的表達(dá)與CD4+、CD4+/CD8+呈現(xiàn)負(fù)相關(guān),與CD8+有正相關(guān)關(guān)系。