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1、目的:檢測Livin,Survivin在肝癌細(xì)胞株HepG2的表達(dá),并檢測運(yùn)用化療藥物處理后肝癌細(xì)胞株HepG2中Livin,Survivin的變化,探討Livin,Survivin在肝癌化療耐藥中的作用,為肝癌的基因治療提供理論基礎(chǔ)及技術(shù)支持。 方法:1.培養(yǎng)肝癌細(xì)胞株HepG2;2.取對數(shù)生長期的肝癌細(xì)胞株,加入低濃度的5-Fu,運(yùn)用PCR方法分別檢測未加5-Fu,加用5-Fu 24小時,加用5-Fu 48小時LivinmR
2、NA,Survivin mRNA的表達(dá);3.取對數(shù)生長期的肝癌細(xì)胞株,加入低濃度的5-Fu,運(yùn)用Western方法分別檢測未加5-Fu,加用5-Fu 24小時,加用5-Fu 48小時Livin蛋白,Survivin蛋白的表達(dá)。 結(jié)果:成功的培養(yǎng)肝癌細(xì)胞株HepG22.PCR方法證實(shí)Livin mRNA,Survivin mRNA在肝癌細(xì)胞株有表達(dá),加用5-Fu后Livin mRNA,Survivin mRNA的表達(dá)有增加,運(yùn)用Q
3、uantity-One凝膠成像分析系統(tǒng)分別測定并比較未加用5-Fu,加用5-Fu 24小時,加用5-Fu 48小時Livin mRNA,Survivin mRNA條帶吸光度值,<<0.5,說明加用5-Fu對Livin mRNA,Survivin mRNA的表達(dá)有顯著差異;Western方法證實(shí)Livin蛋白,Survivin蛋白在肝癌細(xì)胞株有表達(dá),加用5-Fu后Livin蛋白,Survivin蛋白的表達(dá)有增加,運(yùn)用Quantity-On
4、e凝膠成像分析系統(tǒng)分別測定未加用5-Fu,加用5-Fu24小時,加用5-Fu 48小時Livin蛋白,Survivin蛋白條帶吸光度值,P<0.5,說明加用5-Fu對Livin蛋白,Survivin蛋白的表達(dá)有顯著差異 結(jié)論:1.Livin,Survivin在肝癌細(xì)胞株有表達(dá);2.加用5-Fu后,Livin mRNA,Survivin mRNA及Livin蛋白,Survivin蛋白的表達(dá)與未加用5-Fu相比較具有顯著的差異。5-
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