HBx對肝癌細胞內(nèi)源性Survivin表達的影響.pdf

1、目的：Survivin(存活素)是細胞凋亡抑制蛋白家族(IAP)中的一個成員，X基因是HBV基因組里最小的開放讀碼框(ORF)，它與HCC的發(fā)生發(fā)展關(guān)系最密切。探討X基因?qū)?nèi)源性survivin表達的影響以及分析比較survivin在肝炎、肝硬化以及腫瘤組織中的表達，進一步探討survivin在HBV感染的慢性乙型肝炎患者發(fā)展成HCC的可能分子機制奠定理論及實驗基礎(chǔ)。 研究方法:用脂質(zhì)體LipofectmineTM2000分別將

2、pcDNA3.1-HBx(表達X基因)和空質(zhì)粒pcDNA3.1導入HepG2細胞，另設(shè)一組未轉(zhuǎn)染任何質(zhì)粒為空白對照。轉(zhuǎn)染48小時后分別予G418進行篩選建立穩(wěn)定細胞株，進行以下實驗：(1)應用免疫細胞化學技術(shù)檢測HBx的表達。(2)應用免疫細胞化學技術(shù)定性檢測實驗組和對照組中survivin的表達。(3)提取各組細胞總蛋白，通過蛋白免疫印跡(Western Bloting)方法比較各組survivin的表達量，進一步印證細胞免疫技術(shù)的結(jié)

3、果。(4)收集本院經(jīng)病理證實的20例原發(fā)性肝細胞肝癌組織標本(其中低分化9例，中分化7例，高分化4例)以及30例肝炎組織標本(含早期肝硬化組織標本10例，病理分級：G2/S2～G4/S4)，通過免疫組織化學技術(shù)檢測survivin的表達。 結(jié)論:成功地將含X基因表達質(zhì)粒pcDNA3.1-HBx轉(zhuǎn)染至HepG2細胞中，并建立了穩(wěn)定細胞株；X基因可以促進內(nèi)源性survivin蛋白的表達，這可能是HBV感染的慢性乙型肝炎患者發(fā)展至HC