siRNA沉默survivin誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白的表達(dá).pdf

1、目的：研究siRNA沉默肝癌細(xì)胞內(nèi)survivin基因的表達(dá)及其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的效應(yīng)，以及對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白基因表達(dá)的影響。
　　 方法：采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將針對(duì)survivin 編碼基因的不同序列 siRNA 重組質(zhì)粒psiRNA-survivin1、psiRNA-survivin2，以及psiRNA-survivin1+2 分別轉(zhuǎn)染至人肝癌細(xì)胞株HepG2。采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）和倒置熒光顯微鏡檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率；Real-Tim

2、ePCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)survivin和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白mRNA的表達(dá)；倒置顯微鏡和Annexin-V/PI 雙染后FCM檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組肝癌細(xì)胞凋亡率。
　　 結(jié)果：⑴psiRNA-survivin1與psiRNA-survivin2 以及psiRNA-survivin1+2轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株HepG2，Real-Time PCR 以及FCM結(jié)果顯示，psiRNA-survivin1+2 沉默基因以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與其他

3、組相比最為明顯，而psiRNA-survivin2的效果要強(qiáng)于psiRNA-survivin1；⑵轉(zhuǎn)染質(zhì)粒psiRNA-survivin1/2/1+2的人肝癌細(xì)胞株HepG2與轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)質(zhì)粒pgenesil8-HK和未轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染psiRNA-survivin1/2/1+2的腫瘤細(xì)胞內(nèi)survivin mRNA表達(dá)水平顯著降低，轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)質(zhì)粒pgenesil8-HK與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較無(wú)顯著差異；⑶轉(zhuǎn)染psiRNA-survivin1

4、/2/1+2后，細(xì)胞凋亡率明顯增高；⑷轉(zhuǎn)染psiRNA-survivin1/2/1+2的人肝癌細(xì)胞株HepG2與轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)質(zhì)粒pgenesil8-HK與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染psiRNA-survivin1/2/1+2的人肝癌細(xì)胞株內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白 mRNA表達(dá)水平升高，其中psiRNA-survivin1+2作用組升高最為明顯，轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)質(zhì)粒pgenesil8-HK與未轉(zhuǎn)染對(duì)照組比較無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論：siRNA 能夠沉默人肝