中藥復(fù)方誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的:本研究旨在通過補腎填精的中藥復(fù)方（左歸丸）誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞分化，并通過免疫組化鑒定誘導(dǎo)分化后的細胞為神經(jīng)元樣細胞，從而為“腎藏精、生髓”的傳統(tǒng)中醫(yī)理論提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。
　　方法:
　　實驗一利用全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，并在體外擴增、純化，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)，利用左歸丸藥液對分離后的細胞進行誘導(dǎo)分化，通過阿利新藍染色、改良鈣鈷法堿性磷酸酶染色、神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學染色以鑒定分化后的細

2、胞是否為成骨細胞、軟骨細胞、神經(jīng)元樣細胞。
　　實驗二利用全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，利用左歸丸拆藥后的各組藥液分別對獲得的細胞進行誘導(dǎo)分化，并進行神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學染色，計其陽性表達的細胞。
　　結(jié)果:
　　實驗一顯示，分離純化后的細胞，經(jīng)倒置顯微鏡觀察其形態(tài)，再左歸丸藥液誘導(dǎo)分化后，經(jīng)阿利新藍染色、改良鈣鈷法磷酸酶染色、神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學染色，證明獲得的細胞向軟骨細胞、成骨細胞

3、、神經(jīng)元樣細胞進行了分化，獲得的細胞的形態(tài)符合骨髓間充質(zhì)干細胞的形態(tài)表現(xiàn)。
　　實驗二將獲得的骨髓間充質(zhì)干細胞，用左歸丸拆藥后的各組藥液對其進行誘導(dǎo)分化，經(jīng)NSE染色后計陽性表達細胞，結(jié)果顯示撤出熟地NSE表達明顯增高；撤除枸杞后陽性表達率下降最多，其次是山茱萸、山藥、牛膝；撤出菟絲子不影響該酶的表達。
　　結(jié)論:
　　實驗一：采用全骨髓貼壁法獲得的細胞為大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞；中藥復(fù)方左歸丸對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞有多向