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文檔簡介
1、目的:本研究旨在通過補腎填精的中藥復方(左歸丸)誘導骨髓間充質干細胞分化,并通過免疫組化鑒定誘導分化后的細胞為神經(jīng)元樣細胞,從而為“腎藏精、生髓”的傳統(tǒng)中醫(yī)理論提供相應的實驗依據(jù)。
方法:
實驗一利用全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓間充質干細胞,并在體外擴增、純化,倒置顯微鏡下觀察其形態(tài),利用左歸丸藥液對分離后的細胞進行誘導分化,通過阿利新藍染色、改良鈣鈷法堿性磷酸酶染色、神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學染色以鑒定分化后的細
2、胞是否為成骨細胞、軟骨細胞、神經(jīng)元樣細胞。
實驗二利用全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓間充質干細胞,利用左歸丸拆藥后的各組藥液分別對獲得的細胞進行誘導分化,并進行神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學染色,計其陽性表達的細胞。
結果:
實驗一顯示,分離純化后的細胞,經(jīng)倒置顯微鏡觀察其形態(tài),再左歸丸藥液誘導分化后,經(jīng)阿利新藍染色、改良鈣鈷法磷酸酶染色、神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學染色,證明獲得的細胞向軟骨細胞、成骨細胞
3、、神經(jīng)元樣細胞進行了分化,獲得的細胞的形態(tài)符合骨髓間充質干細胞的形態(tài)表現(xiàn)。
實驗二將獲得的骨髓間充質干細胞,用左歸丸拆藥后的各組藥液對其進行誘導分化,經(jīng)NSE染色后計陽性表達細胞,結果顯示撤出熟地NSE表達明顯增高;撤除枸杞后陽性表達率下降最多,其次是山茱萸、山藥、牛膝;撤出菟絲子不影響該酶的表達。
結論:
實驗一:采用全骨髓貼壁法獲得的細胞為大鼠骨髓間充質干細胞;中藥復方左歸丸對大鼠骨髓間充質干細胞有多向
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