高鈣對(duì)大鼠腎上皮細(xì)胞的損傷效應(yīng)及骨橋蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察高鈣對(duì)大鼠腎上皮細(xì)胞(NRK細(xì)胞)的損傷效應(yīng)以及對(duì)骨橋蛋白(OPN)表達(dá)的影響，探討高鈣尿在含鈣腎結(jié)石形成中的作用和機(jī)制。
　　方法：分別用含鈣終濃度為1mg/ml、2mg/ml和3mg/ml的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)NRK細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組1,2,3)，空白對(duì)照組采用DMEM完全培養(yǎng)基，共同培養(yǎng)3小時(shí)、6小時(shí)和24小時(shí)后，采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖；細(xì)胞培養(yǎng)上清液應(yīng)用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞OPN的分泌情況；收集細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)

2、胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；應(yīng)用real time RT-PCR法和Western Blot法，檢測(cè)細(xì)胞OPN基因mRNA及蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1)空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2和實(shí)驗(yàn)組3培養(yǎng)3小時(shí)的吸光度值(OD值)分別為3.147±0.060、2.844±0.309、2.321±0.089、19.893±0.611,6小時(shí)為3.472±0.097、2.878±0.127、2.545±0.06、2.222±0.047，24小時(shí)

3、為3.851±0.096、1.831±0.076、0.669±0.093、0.569±0.004，除實(shí)驗(yàn)組1在3h較空白對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外，各實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)較對(duì)照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。各實(shí)驗(yàn)組內(nèi)在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行兩兩比較，除實(shí)驗(yàn)組1在3h和6h差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其他均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(2)各組細(xì)胞在培養(yǎng)3小時(shí)后的凋亡率分別為2.36%、3.07%、4.53%、5.40%，6小時(shí)后的

4、凋亡率分別為2.36%、4.75%、7.28%、7.83%，24小時(shí)后的凋亡率分別為2.36%、41.76%、56.84%、62.96%。(3)各組細(xì)胞培養(yǎng)3小時(shí)后上清液中OPN的含量(μg/ml)分別為10.461±1.573、14.820±1.213、17.150±0.841、19.893±0.611，6小時(shí)分別為10.461±1.573、23.791±1.518、26.307±0.876、28.607±0.733，24小時(shí)分別為1

5、0.461±1.573、26.882±1.100、28.948±1.818、24.377±0.641。三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各實(shí)驗(yàn)組分別與空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一實(shí)驗(yàn)組內(nèi)在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行兩兩比較，除實(shí)驗(yàn)組2在6h和24h差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外，其余均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組在高鈣干預(yù)3小時(shí)和6小時(shí)后細(xì)胞OPN蛋白相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同一實(shí)驗(yàn)組

6、內(nèi)在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行兩兩比較，除實(shí)驗(yàn)組2和實(shí)驗(yàn)組3在3h這一時(shí)間點(diǎn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外，其余均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(5)三個(gè)實(shí)驗(yàn)組在高鈣干預(yù)3小時(shí)(6小時(shí))后細(xì)胞 OPN mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別是空白對(duì)照組的2.803(9.989)倍,5.195(12.999)倍,8.380(27.929)倍，較對(duì)照組明顯升高。
　　結(jié)論：高濃度鈣可明顯抑制 NRK細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，細(xì)胞 OPN基因表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞分泌