miR-21基因治療聯(lián)合化療抑制腦膠質(zhì)瘤的時序效應研究.pdf

1、化療耐受是惡性腦膠質(zhì)瘤化療效果不理想的重要原因之一，本文基于miR-21抑制劑對化療耐藥相關信號通路的調(diào)控機制，以PAMAM樹形大分子為基因載體，分別研究了miR-21基因治療對替莫唑胺、鹽酸阿霉素和紫杉醇化療的增敏效果，并研究了時序性聯(lián)合用藥對膠質(zhì)瘤細胞抑制效果的影響。原位雜交結果表明PAMAM樹形大分子可有效介導miR-21抑制劑在膠質(zhì)瘤細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)染，顯著敲低腫瘤細胞內(nèi)miR-21的表達。MTT測試分析證明miR-21抑制劑與化療藥

2、物聯(lián)用后分別使替莫唑胺、鹽酸阿霉素和紫杉醇三種藥物的IC50值降低2到3倍。以Q值衡量miR-21抑制劑與三種化療藥物不同用藥時序時對LN229和U251細胞的抑制效果，發(fā)現(xiàn)對前者同時用藥時miR-21抑制劑和化療藥物表現(xiàn)出最強的協(xié)同作用，而對后者同時用藥時則表現(xiàn)為弱的加和作用，當miR-21抑制劑和化療藥物間隔4小時用藥時表現(xiàn)出協(xié)同作用。
　　 為研究miR-21抑制劑和化療藥物聯(lián)合用藥時抑制膠質(zhì)瘤細胞的時效機制，選擇LN22

3、9(PTEN野生型)、U251(PTEN突變型)和U87(PTEN缺失型)三種不同遺傳背景的膠質(zhì)瘤細胞系，分析了miR-21抑制劑和替莫唑胺聯(lián)用時細胞耐藥相關信號轉(zhuǎn)導通路的變化及與抑瘤效果的關系。原位雜交和熒光定量PCR結果分析證明聯(lián)合用藥時三種細胞系的增殖與其miR-21的表達呈負相關，流式細胞分析和Western Blot檢測表明聯(lián)合用藥誘導的促凋亡的能力依賴STAT3的狀態(tài)，即無論哪種細胞系，當STAT3被miR-21抑制劑或替莫