腸易激綜合征慢急性聯(lián)合應(yīng)激大鼠模型結(jié)腸5-羥色胺信號(hào)水平改變.pdf

1、研究背景：腸易激綜合癥(IBS)是以腸道動(dòng)力異常和內(nèi)臟高敏感性為病理生理學(xué)基礎(chǔ)，常伴精神心理行為改變的一組癥候群。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)、去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)是腸神經(jīng)系統(tǒng)重要的神經(jīng)遞質(zhì)，參與腸道動(dòng)力、感覺、分泌的調(diào)控。IBS患者存在腸道5-HT信號(hào)通路改變、交感神經(jīng)功能紊亂。5-羥色胺1A(5-HT1A)受體參與內(nèi)臟感覺的調(diào)控。 本實(shí)驗(yàn)室前期創(chuàng)立了慢急性聯(lián)合應(yīng)激IBS動(dòng)物模型(下稱慢急性應(yīng)激模型)，

2、即動(dòng)物在接受慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激(CUMS)后接受一次急性束縛應(yīng)激，已證實(shí)該模型兼有腸道動(dòng)力異常、內(nèi)臟高敏感性、分泌異常和心理行為改變，同時(shí)還具有穩(wěn)定與重復(fù)性好的特點(diǎn)。利用該模型的研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)側(cè)腦室或腹腔注射5-HT1A受體激動(dòng)劑(8-OH-DPAT)，慢急性應(yīng)激組大鼠直腸擴(kuò)張時(shí)腹肌收縮次數(shù)明顯增加，而對(duì)照組給藥前后無(wú)改變；慢急性應(yīng)激組與對(duì)照組比較，大鼠脊髓背角5-HT1A受體mRNA表達(dá)明顯增加，結(jié)腸NE轉(zhuǎn)運(yùn)體和α2腎上腺素受體蛋白水平

3、均顯著降低，結(jié)腸5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體mRNA無(wú)明顯改變。 研究目的： 1.測(cè)定各應(yīng)激模型大鼠結(jié)腸5-HT和5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)的濃度以及結(jié)腸色氨酸羥化酶1(TPH1)mRNA表達(dá)水平，揭示應(yīng)激對(duì)大鼠結(jié)腸5-HT代謝的影響。 2.測(cè)定各應(yīng)激模型大鼠結(jié)腸5-HT1A受體蛋白及其mRNA表達(dá)水平，以及IBS患者直乙交界處結(jié)腸粘膜5-HT1A受體mRNA表達(dá)水平，初步探討腸道5-HT1A受體在內(nèi)臟感覺調(diào)控中的作用。

4、 3.測(cè)定各應(yīng)激模型大鼠結(jié)腸NE和DA含量，揭示應(yīng)激對(duì)結(jié)腸NE、DA含量的影響。 材料與方法：選用健康Wistar大鼠(雄性，體重160-200g)，分為對(duì)照組、急性應(yīng)激組(急性束縛1小時(shí))、慢性應(yīng)激組(CUMS，21天不可預(yù)知輕度應(yīng)激)、慢急性應(yīng)激組(CUMS的基礎(chǔ)上給予急性束縛應(yīng)激)，通過(guò)檢測(cè)大鼠一般情況(體重增長(zhǎng))、腸道動(dòng)力(排便顆粒數(shù)/小時(shí))、內(nèi)臟感覺(直腸擴(kuò)張時(shí)腹肌收縮次數(shù))以及心理行為(糖水?dāng)z取量/小時(shí))對(duì)各模

5、型進(jìn)行評(píng)價(jià)。人類直乙交界處結(jié)腸粘膜標(biāo)本取自IBS患者(符合羅馬Ⅱ標(biāo)準(zhǔn)，24例)、類IBS癥狀者(9例)及對(duì)照(4例)。采用RT-PCR方法檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸5-HT1A受體mRNA、TPH1mRNA及人類結(jié)腸粘膜5-HT1A受體mRNA水平；WesternBlot方法檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸5-HT1A受體蛋白水平；高效液相色譜-電化學(xué)檢測(cè)法(HPLC-ED)檢測(cè)各組大鼠結(jié)腸5-HT、5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)、NE以及DA濃度。 結(jié)

6、論： 1.慢急性聯(lián)合應(yīng)激組模型可部分模擬人類IBS癥狀，兼有腸道動(dòng)力異常、內(nèi)臟高敏感性、心理行為改變，具有穩(wěn)定與重復(fù)性好的特點(diǎn)。 2.急性應(yīng)激可促進(jìn)結(jié)腸5-HT合成，對(duì)結(jié)腸5-HT含量無(wú)顯著影響，同時(shí)可引起結(jié)腸5-HT1A受體基因mRNA及其蛋白表達(dá)上調(diào)。慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激可促進(jìn)結(jié)腸5-HT合成增多，降解活躍，致使利用大于合成，結(jié)腸5-HT總量降低，同時(shí)可造成結(jié)腸5-HT1A受體蛋白表達(dá)下調(diào)。慢急性應(yīng)激可引起結(jié)腸5-H