腸易激綜合征腸粘膜屏障功能的研究.pdf

1、腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是一組以排便后緩解或減輕的腹痛或腹部不適癥狀為主要癥狀，同時伴隨有排便習慣及大便性狀改變的功能性腸道疾病。根據(jù)大便性狀的不同，Rome Ⅱ將IBS分為3個癥狀亞型，即腹瀉型IBS，便秘型IBS及交替型IBS。IBS的發(fā)病機制目前尚未完全闡明，它是一種多因素疾病，其發(fā)病原因涉及精神心理因素，食物過敏，發(fā)病前的胃腸道感染病史等。最近的研究發(fā)現(xiàn)腹瀉型IBS患者存在著小腸通

2、透性增高的現(xiàn)象，這種增高的腸通透性從何而來以及是否與臨床癥狀有關目前尚不清楚。盡管IBS患者在結腸鏡下的表現(xiàn)及活檢組織的蘇木素-伊紅染色是正常，但使用免疫組織化學染色方法卻發(fā)現(xiàn)腹瀉型IBS病人結腸和直腸粘膜中活化淋巴細胞的數(shù)量較正常人明顯增多，這提示著部分腹瀉型IBS病人存在著低度腸道慢性炎癥和局部免疫系統(tǒng)的活化，也意味著這種持續(xù)存在的腸道低度炎癥可能與某些腹瀉型IBS患者的癥狀發(fā)生有關。 目的: 1.觀察腹瀉型IBS患

3、者的小腸和結腸粘膜屏障功能改變，并探討其與結腸炎癥及臨床癥狀之間的關系；觀察腹瀉型IBS患者的上皮細胞間連接復合體及主要緊密連接分子(ZO-1和occludin)的mRNA表達水平及蛋白表達水平和分布。 2.觀察短期活性乳酸菌治療對腹瀉型IBS患者的腸粘膜屏障功能及癥狀的臨床療效。 3.觀察熱滅活乳酸菌混合物(L.bulgaricus，S. thermophilus和L.acidophilus)能否拮抗炎癥介質對人結腸癌

4、上皮細胞Caco-2上皮屏障功能及緊密連接分子ZO-1和occludin的損害作用；觀察熱滅活乳酸菌能否拮抗炎癥介質所誘導的一氧化氮(nitric oxide，NO)產量增加和誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)mRNA表達升高。 方法： 1.30例符合Rome II腹瀉型IBS診斷標準的患者參加該研究，同時入組12例無消化道癥狀且結腸鏡檢查正常的健康志愿者為正常

5、對照組。研究對象的腸粘膜屏障功能評價指標為腸道通透性。采用三聯(lián)糖分子探針法檢測受試者的小腸和結腸通透性，檢查前受試者空腹并排空膀胱，服用100ml的測試液，含有10g乳果糖、5g甘露醇和5g三氯蔗糖(sucralose)，然后連續(xù)收集受試者5h和24h的尿液，并記錄5h和24h的總尿量。采用氣相色譜法檢測尿液中糖分子的濃度。小腸通透性以5h尿中乳果糖/甘露醇排泄率比值表示，結腸通透性以24h尿中三氯蔗糖的總含量表示(mg)。 2

6、.采用隨機單盲安慰劑對照設計，入組30例符合Rome II診斷標準的腹瀉型IBS患者，按1:1的比例隨機分入益生菌組和安慰劑組，益生菌組服用酸牛乳(AB100，中國光明)190g，每天兩次，餐前半小時服用，安慰劑組服用配置型含乳飲料(中國光明)200ml，每天兩次，餐前半小時服用。療程為4周。酸牛乳含有4種乳酸菌，為S.thermophilus，L.bulgaricus，L.acidophilus和Bifidobacterium，而含乳

7、飲料與酸牛乳顏色、粘稠度及口感相似但不含有任何細菌。 3.L.bulgaricus，S. thermophilus和L.acidophilus用于該研究。乳酸菌熱滅活的條件是為65℃，1h?；旌虾蟮娜樗峋?mixture of lactic acid bacteria，Mix-LAB)濃度為S.Thermophilus，L.Bulgaricus和L.Acidophilus的總菌體細胞濃度，三者的比例為1:1:1。選擇人結腸上皮

8、細胞Caco-2構建體外屏障模型，Caco-2細胞生長至融合后的14-21天后，改用無血清無抗生素的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h，使細胞獲得同步生長并處于靜止期，隨后進行干預。 結論： 1.腹瀉型IBS患者存在著小腸和結腸粘膜機械屏障功能不足，與結腸炎癥程度和臨床癥狀均無明顯相關。 2.部分腹瀉型IBS患者的結腸上皮細胞間連接復合體異常。部分腹瀉型IBS患者結腸粘膜的主要緊密連接分子(ZO-1和occludin

9、)的轉錄表達水平及蛋白表達水平下降，但ZO-1和occludin蛋白的分布部位并無改變。 3.短期活性乳酸菌治療可顯著改善腹瀉型IBS患者的小腸粘膜屏障功能和臨床癥狀，但不能改善結腸粘膜屏障功能。 4.熱滅活乳酸菌混合物對炎癥介質引起的上皮細胞屏障功能障礙具有保護作用，其作用呈劑量依賴性。改善細胞通透性的作用通過改變緊密連接分子(ZO-1和occludin)基因、蛋白表達水平和蛋白分布。其作用機制與熱滅活乳酸菌抑制炎癥介