腸易激綜合征腸粘膜屏障功能的研究.pdf

1、腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是一組以排便后緩解或減輕的腹痛或腹部不適癥狀為主要癥狀，同時伴隨有排便習(xí)慣及大便性狀改變的功能性腸道疾病。根據(jù)大便性狀的不同，Rome Ⅱ?qū)BS分為3個癥狀亞型，即腹瀉型IBS，便秘型IBS及交替型IBS。IBS的發(fā)病機(jī)制目前尚未完全闡明，它是一種多因素疾病，其發(fā)病原因涉及精神心理因素，食物過敏，發(fā)病前的胃腸道感染病史等。最近的研究發(fā)現(xiàn)腹瀉型IBS患者存在著小腸通

2、透性增高的現(xiàn)象，這種增高的腸通透性從何而來以及是否與臨床癥狀有關(guān)目前尚不清楚。盡管IBS患者在結(jié)腸鏡下的表現(xiàn)及活檢組織的蘇木素-伊紅染色是正常，但使用免疫組織化學(xué)染色方法卻發(fā)現(xiàn)腹瀉型IBS病人結(jié)腸和直腸粘膜中活化淋巴細(xì)胞的數(shù)量較正常人明顯增多，這提示著部分腹瀉型IBS病人存在著低度腸道慢性炎癥和局部免疫系統(tǒng)的活化，也意味著這種持續(xù)存在的腸道低度炎癥可能與某些腹瀉型IBS患者的癥狀發(fā)生有關(guān)。 目的: 1.觀察腹瀉型IBS患

3、者的小腸和結(jié)腸粘膜屏障功能改變，并探討其與結(jié)腸炎癥及臨床癥狀之間的關(guān)系；觀察腹瀉型IBS患者的上皮細(xì)胞間連接復(fù)合體及主要緊密連接分子(ZO-1和occludin)的mRNA表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平和分布。 2.觀察短期活性乳酸菌治療對腹瀉型IBS患者的腸粘膜屏障功能及癥狀的臨床療效。 3.觀察熱滅活乳酸菌混合物(L.bulgaricus，S. thermophilus和L.acidophilus)能否拮抗炎癥介質(zhì)對人結(jié)腸癌

4、上皮細(xì)胞Caco-2上皮屏障功能及緊密連接分子ZO-1和occludin的損害作用；觀察熱滅活乳酸菌能否拮抗炎癥介質(zhì)所誘導(dǎo)的一氧化氮(nitric oxide，NO)產(chǎn)量增加和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)mRNA表達(dá)升高。 方法： 1.30例符合Rome II腹瀉型IBS診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者參加該研究，同時入組12例無消化道癥狀且結(jié)腸鏡檢查正常的健康志愿者為正常

5、對照組。研究對象的腸粘膜屏障功能評價指標(biāo)為腸道通透性。采用三聯(lián)糖分子探針法檢測受試者的小腸和結(jié)腸通透性，檢查前受試者空腹并排空膀胱，服用100ml的測試液，含有10g乳果糖、5g甘露醇和5g三氯蔗糖(sucralose)，然后連續(xù)收集受試者5h和24h的尿液，并記錄5h和24h的總尿量。采用氣相色譜法檢測尿液中糖分子的濃度。小腸通透性以5h尿中乳果糖/甘露醇排泄率比值表示，結(jié)腸通透性以24h尿中三氯蔗糖的總含量表示(mg)。 2

6、.采用隨機(jī)單盲安慰劑對照設(shè)計(jì)，入組30例符合Rome II診斷標(biāo)準(zhǔn)的腹瀉型IBS患者，按1:1的比例隨機(jī)分入益生菌組和安慰劑組，益生菌組服用酸牛乳(AB100，中國光明)190g，每天兩次，餐前半小時服用，安慰劑組服用配置型含乳飲料(中國光明)200ml，每天兩次，餐前半小時服用。療程為4周。酸牛乳含有4種乳酸菌，為S.thermophilus，L.bulgaricus，L.acidophilus和Bifidobacterium，而含乳

7、飲料與酸牛乳顏色、粘稠度及口感相似但不含有任何細(xì)菌。 3.L.bulgaricus，S. thermophilus和L.acidophilus用于該研究。乳酸菌熱滅活的條件是為65℃，1h。混合后的乳酸菌(mixture of lactic acid bacteria，Mix-LAB)濃度為S.Thermophilus，L.Bulgaricus和L.Acidophilus的總菌體細(xì)胞濃度，三者的比例為1:1:1。選擇人結(jié)腸上皮

8、細(xì)胞Caco-2構(gòu)建體外屏障模型，Caco-2細(xì)胞生長至融合后的14-21天后，改用無血清無抗生素的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h，使細(xì)胞獲得同步生長并處于靜止期，隨后進(jìn)行干預(yù)。 結(jié)論： 1.腹瀉型IBS患者存在著小腸和結(jié)腸粘膜機(jī)械屏障功能不足，與結(jié)腸炎癥程度和臨床癥狀均無明顯相關(guān)。 2.部分腹瀉型IBS患者的結(jié)腸上皮細(xì)胞間連接復(fù)合體異常。部分腹瀉型IBS患者結(jié)腸粘膜的主要緊密連接分子(ZO-1和occludin

9、)的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平下降，但ZO-1和occludin蛋白的分布部位并無改變。 3.短期活性乳酸菌治療可顯著改善腹瀉型IBS患者的小腸粘膜屏障功能和臨床癥狀，但不能改善結(jié)腸粘膜屏障功能。 4.熱滅活乳酸菌混合物對炎癥介質(zhì)引起的上皮細(xì)胞屏障功能障礙具有保護(hù)作用，其作用呈劑量依賴性。改善細(xì)胞通透性的作用通過改變緊密連接分子(ZO-1和occludin)基因、蛋白表達(dá)水平和蛋白分布。其作用機(jī)制與熱滅活乳酸菌抑制炎癥介