地塞米松促進β-淀粉樣蛋白的神經元毒性及其機理研究.pdf

1、早老性癡呆(Alzheimer′s disease，AD)是以進行性記憶丟失和認知能力下降為特征的神經退行性疾病。主要病理特征是選擇性的神經元突觸損傷、神經纖維纏繞(neurofibrillary tangle，NFT)和老年斑(senile plaques，SP)。β-淀粉樣蛋白(Amyloidβ-peptide，Aβ)是構成老年斑或淀粉樣斑塊的主要成份，在AD的發(fā)病和進展中起關鍵作用。糖皮質激素(glucocorticoids，GC

2、s)是由腎上腺皮質束狀帶合成和分泌的類固醇激素，是臨床上應用最為廣泛的激素類藥物。海馬是與學習記憶、行為和情緒密切相關的重要腦區(qū)，是GCs最為敏感的神經靶位。體內高水平GCs可透過血腦屏障進入腦組織，引起海馬突觸丟失、海馬萎縮，加重海馬齒狀回神經元凋亡。因此，地塞米松(Dexamethasone，DEX)是否加重Aβ的神經元毒性作用有待研究。 目的 在體外實驗條件下，觀察DEX，Ap及其聯(lián)合作用對海馬神經元的影響，以探討

3、GCs是否加重Aβ的神經元毒性作用。 方法 取孕 18 天Sprague Dawley(SD)大鼠胚胎的海馬神經元進行體外原代分離培養(yǎng)，于聯(lián)合實驗中先加入10μM DEX作用24h后，再加入5μM Aβ<,25-35>作用24h后觀察損傷情況。應用MTT法進行細胞活力分析；運用 TUNEL 法檢測海馬神經元的凋亡情況，觀察其凋亡特征：通過檢測神經元胞內 Ca<'2+>濃度、核NF-κB蛋白水平，探討DEX是蠆通過促進海馬

4、神經元胞內 Ca<'2+>和/或抑制核NF-κB蛋白量來促進Aβ的神經元毒性；通過檢測海馬神經元p-tau蛋白含量，進一步探討DEX是否通過提高p-tau水平促進Aβ的神經元毒性作用；通過檢測海馬神經元的p53蛋白質水平，擬探討海馬神經元的凋亡途徑。 結果 1．細胞活力檢測發(fā)現(xiàn)(MTT 法)，DEX(0．01μM～10 μM)和Aβ<,25-35>(1，5μM)對培養(yǎng)的海馬神經元活性沒有影響(P>0．05)，但DEX(1

5、，10μM)作用24h后，再和Aβ<,25-35>(1μM，5μM)孵育24h，吸光度(A值)明顯降低(P<0．05)，且呈劑量依賴性。 2．TUNEL法檢測10μM DEX和5μM Aβ<,25-35>作用海馬神經元時，TUNEL染色的陽性細胞增加不明顯(P>0.05)，但經10μM DEX作用24h后，再和5μM Aβ<,25-35>孵育24h，凋亡率明顯增加，與同劑量的DEX和Aβ<,25-35>相比，差異有顯著性(P<0

6、.05)。 3． 10μM DEX作用海馬神經元24h，激光共聚焦顯微鏡檢測神經元胞內Ca<'2+>水平沒有增加(P>0.05)，5μM Aβ<,25-35>處理的神經元，胞內 Ca<'2+>有輕微的升高(P<0.05)，但10μM DEX作用海馬神經元24h后，再加入5μM Aβ<,25-35>作用60min，與同劑量的Aβ<,25-35>相比，胞內Ca<'2+>濃度明顯增加(P<0.05)。 4．Aβ可劑量依賴性地引

7、起神經元核NF-κB蛋白增加。與對照組(0μM Aβ，0μMDEX)相比，10μM DEX使神經元核NF-κB表達量減少，5μM Aβ<,25-35>能夠增加核NF-κB表達量，與同劑量的AB相比，DEX+Aβ<,25-35>組的核NF-κB表達量有顯著性差異(P<0.05)。此外，與對照組相比，5μM Aβ<,25-35>作用海馬神經元時，胞漿NF-κB和IκBα表達量降低(P<0.05)，DEX組的胞漿NF-κB和IκBα表達量增加

8、(P<0.05)，但與同劑量的Aβ組相比，DEX+Aβ<,25-35>組的胞漿NF-κB和IκBα表達量，有顯著性差異(P<0.05)。 5．與對照組(0μMAp，0μDEX)相比，10μM DEX不能增加p53蛋白量(P>0.05)，5μM Aβ<,25-35>組的p53蛋白量增加明顯(P<0.05)，DEX+Aβ<,25-35>的p53蛋白表達量與同劑量Aβ<,25-35>組相比，差異沒有顯著性(P<0.05)。 6

9、．Aβ<,25-35>能夠呈劑量依賴性的增加海馬神經元 p-tau-Thr231 表達量。與對照組(0μM Aβ，0μM DEX)相比，10μM DEX作用海馬神經元亦能增加p-tau-Thr231的水平，但與同劑量DEX和Aβ<,25-35>組相比，10μM DEX+1μM Aβ<,25-35>組。 結論 DEX可明顯促進Aβ的神經元毒性作用，DEX可能通過促進Aβ引起海馬神經元胞內Ca<'2+>升高、抑制核NF-κB