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文檔簡介
1、背景:帕金森癡呆及路易小體癡呆是臨床中常見的一類以α-synuclein(α-syn)、β-Amyloid1-42(Aβ1-42)異常聚集為病理特點的神經(jīng)退行性變疾病,最終發(fā)展為知功能障礙,這嚴(yán)重影響到人類的健康和生活質(zhì)量。因此,探尋上述病理改變導(dǎo)致發(fā)病機(jī)制及病理改變間的關(guān)系十分關(guān)鍵。
目的:(1)探討α-syn和Aβ142寡聚體對小鼠原代皮層和海馬神經(jīng)細(xì)胞軸突生理功能的影響;(2)進(jìn)一步驗證α-syn和Aβ1-42寡聚體對原
2、代神經(jīng)細(xì)胞突觸再攝取功能、活性的影響,從而說明突觸囊泡相關(guān)蛋白半胱氨酸伸展蛋白α(cysteine-string proteinα,CSPα)與突觸功能的關(guān)系。
方法:(1)17d昆明孕鼠胎鼠,培養(yǎng)原代海馬和皮層神經(jīng)細(xì)胞,以2×105個/孔的密度種在24孔板中,分為DMSO干預(yù)組(DMSO組)、Aβ42-1干預(yù)組(Aβ42-1組)、α-syn干預(yù)組(α-syn組)、Aββ1-42寡聚體干預(yù)組(Aβ1-42組)、α-syn+ A
3、β42-1干預(yù)組(α-syn+ Aβ42-1組)、α-syn+Aβ1-42寡聚體組(α-syn+Aβ1-42組)共6組,每組觀察6個孔。干預(yù)24h后,通過免疫熒光法檢測各組原代神經(jīng)細(xì)胞的病理學(xué)及synapsinⅠ變化,并采用FM1-43染色法檢測神經(jīng)元的突觸數(shù)量及活性,同時用Western blot法檢測半胱氨酸伸展蛋白α(cysteine-string proteinα,CSPα)表達(dá)。(2)實驗均以均數(shù)(x-±SEM)表示,采用Gr
4、aphPad Prism統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,采用單因素方差分析(ANOVA),P<0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)果:(1)干預(yù)原代海馬和皮層神經(jīng)細(xì)胞24h后,神經(jīng)細(xì)胞生理結(jié)構(gòu)受到影響,熒光顯微鏡下分別受到α-synuclein、Aβ1-42寡聚體干預(yù)的神經(jīng)細(xì)胞軸突胞胞體完整、形狀規(guī)則,但軸突較DMSO組短,且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);受到α-synuclein+Aβ1-42寡聚體干預(yù)的神經(jīng)細(xì)胞鏡下觀察示胞體開始出現(xiàn)腫脹
5、、形狀不規(guī)則,軸突較其他5組短明顯變短,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);(2) synapsinⅠ免疫熒光結(jié)果:Aβ1-42組、α-syn組、α-syn+Aβ42-1的synapsinⅠ陽性信號點較對照組減少,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Aβ1-42+α-syn組細(xì)胞synapsinⅠ含量減少最明顯,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);(3) Synaptophysin的ELISA結(jié)果:Aβ1-42組、α-syn組、α-syn+Aβ42-1的
6、Synaptophysin含量較對照組減少,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Aβ1-42+α-syn組細(xì)胞SynaptophysinⅠ含量減少最明顯,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);(4)神經(jīng)細(xì)胞攝取FM1-43結(jié)果:α-syn和Aβ1-42組攝取染料較對照組少,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而α-syn+Aβ1-42共同干預(yù)后細(xì)胞攝取染料顯著下降,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);(5)突觸相關(guān)蛋白CSPα含量:Western blot方法檢
7、測,Aβ1-42組和α-syn組的CSPα含量較DMSO組和Aβ42-1組顯著降低,有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05;而α-syn+Aβ1-42組,CSPα的含量降低最為顯著,P<0.01。
結(jié)論:原代海馬和皮層神經(jīng)細(xì)胞在α-syn、Aβ1-42寡聚體干預(yù)24h后,會分別影響神經(jīng)細(xì)胞的生理結(jié)構(gòu)、突觸數(shù)量及活性,而且發(fā)現(xiàn)在α-syn、Aβ1-42寡聚體共同影響下,上述改變尤為顯著,并且突觸相關(guān)蛋白CSPα也會隨之顯著下降,這表明當(dāng)神經(jīng)細(xì)
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