雷公藤內(nèi)酯醇對耐順鉑卵巢癌細胞株(SKOV3-DDP)體外活性影響機制的初步探討.pdf

1、目的:
　　通過體外實驗觀察雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide，TPL)對耐順鉑人上皮性卵巢癌細胞株(SKOV3/DDP)的凋亡誘導(dǎo)作用，探討其可能的作用機制，評價其臨床應(yīng)用價值，為使雷公藤內(nèi)酯醇有望成為失去手術(shù)機會的晚期或耐化療卵巢癌病人的有效治療和/或增敏藥物提供體外實驗與理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.用不同濃度（0nM、12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM）的TPL分別處理耐順鉑人上皮性卵巢癌細

2、胞株SKOV3/DDP24 h、48 h后，四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測SKOV3/DDP細胞的存活率。
　　2.用不同濃度（0 nM、12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM）的TPL分別處理耐順鉑人上皮性卵巢癌細胞株SKOV3/DDP24 h后，應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測TPL對SKOV3/DDP細胞凋亡率的影響。
　　3.100 nM TPL處理SKOV3/DDP細胞1h、12h、24h后，應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測SK

3、OV3/DDP細胞內(nèi)的活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平。
　　4.分別以5 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cystein， NAC)、100nmol/L TPL單獨處理SKOV3/DDP細胞24 h及應(yīng)用5 mmol/L NAC預(yù)處理1h后再加入100 nmol/L TPL處理SKOV3/DDP細胞24 h，流式細胞術(shù)檢測TPL聯(lián)合NAC作用SKOV3/DDP細胞24 h

4、后細胞凋亡率及細胞內(nèi)ROS水平的變化。
　　5.用不同濃度（0nM、12.5 nM、25 nM、50 nM、100nM）的TPL分別處理耐順鉑人上皮性卵巢癌細胞株SKOV3/DDP24 h后，Westem blot方法檢測SKOV3/DDP細胞中核因子-κB(NF-κB) p65核蛋白、Bcl-2、Caspase3蛋白水平的表達變化。
　　結(jié)果:
　　1.用不同濃度(12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM

5、)的TPL分別處理SKOV3/DDP細胞24、48 h后，細胞平均存活率分別為95.192％±0.048％、87.106％±0.379％、65.943％±0.112％、56.426％±0.285％、77.165％±0.228％、64.313％±0.656％、34.452％±0.798％、24.824％±1.450％。
　　2.用不同濃度（12.5 nM、25 nM、50 nM、100 nM）的TPL分別處理SKOV3/DDP細胞2

6、4 h后，細胞平均凋亡率分別為12.53％±0.42％、22.87％±0.31％、35.47％±0.16％、52.19％±0.27％。
　　3.100 nmol/L TPL分別作用SKOV3/DDP細胞1h、12h、24 h后，ROS水平較陰性對照組相比分別增加3.49±0.21倍、7.72±0.42倍、9.17±0.76倍。
　　4.5 mmol/LNAC作用SKOV3/DDP細胞24 h后，SKOV3/DDP細胞內(nèi)ROS

7、水平和細胞凋亡率較對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。100 nmol/L TPL作用SKOV3/DDP細胞24 h后，SKOV3/DDP細胞ROS的產(chǎn)生是對照組的9.41±0.57倍，細胞凋亡率為48.2％±1.2％。SKOV3/DDP細胞經(jīng)5mmol/L NAC預(yù)處理1小時后，再加入100 nmol/L TPL作用24h，SKOV3/DDP細胞ROS的產(chǎn)生是對照組的2.72±0.35倍，細胞凋亡率為21.6％±1.2％。

8、r>　　5.Western blot結(jié)果顯示，隨著TPL濃度的增大，SKOV3/DDP細胞內(nèi)NF-κBp65核蛋白、Bcl-2表達下降，caspase3激活型蛋白表達增多。
　　結(jié)論:
　　1.TPL具有顯著抑制耐順鉑人上皮性卵巢癌細胞SKOV3/DDP的增殖，并誘導(dǎo)其凋亡的作用。
　　2.TPL以時間依賴的方式誘導(dǎo)SKOV3/DDP細胞活性氧產(chǎn)生增加。
　　3.抗氧化劑NAC能夠顯著抑制TPL介導(dǎo)的SKOV3/