雌激素聯(lián)合順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO-8910體外生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的: 探討17-βE2聯(lián)合順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO-8910體外生長(zhǎng)、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響。 方法: 1．采用MTT法檢測(cè)雌激素單用及合用順鉑對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 2．流式細(xì)胞儀分析不同濃度雌激素及聯(lián)合順鉑對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響。 3．光鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察雌激素及雌激素聯(lián)合順鉑對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響。 結(jié)果: 1．人卵巢癌細(xì)胞HO-8910形態(tài)學(xué)變化（1）倒置顯微鏡觀察：對(duì)照組和

2、雌激素組卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，細(xì)胞伸展，呈鋪路石狀，隨時(shí)間推移，細(xì)胞漸增多，細(xì)胞接觸緊密。雌激素聯(lián)合順鉑組卵巢癌細(xì)胞24h時(shí)見(jiàn)到細(xì)胞數(shù)目較少，但形態(tài)尚可，隨時(shí)間推移，細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡，培養(yǎng)至72h時(shí)，細(xì)胞明顯皺縮，體積變小，細(xì)胞間隙增大，培養(yǎng)液內(nèi)可見(jiàn)少量細(xì)胞懸浮，部分細(xì)胞可見(jiàn)碎裂的細(xì)胞核，而胞漿仍完整。（2）激光共聚焦顯微鏡觀察：對(duì)照組可見(jiàn)極少量凋亡細(xì)胞，順鉑組，雌激素組與對(duì)照組無(wú)明顯差異。雌激素與順鉑聯(lián)用組出現(xiàn)大量典型的凋亡細(xì)胞，細(xì)

3、胞膜染色明顯增強(qiáng)，熒光更為明亮，強(qiáng)度深淺不一。 2．順鉑、17-βE2及兩藥聯(lián)合對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株HO-8910增殖、凋亡的影響（1）17-βE2對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO-8910增殖的抑制作用：17-βE2作用24h后HO-8910細(xì)胞生長(zhǎng)輕度增殖，但無(wú)顯著性差異（P>0．05）：48h后濃度為10×10-9～50×10-9mol/L，對(duì)細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用，增殖促進(jìn)率分別為22．8％和26．5％與對(duì)照組比較有顯著性差異（P<0．05）

4、；72h后17-βE2作用較穩(wěn)定，各處理組與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異（p>0．05）。（2）17-βE2聯(lián)合順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞HO-8910增殖的抑制作用：17-βE2聯(lián)合順鉑作用24 h后HO-8910細(xì)胞生長(zhǎng)輕度抑制，50×10-9mol/L濃度對(duì)細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，有顯著性差異（P<0．05）；48 h后5×10-9mol/L-50×10-9mol/L濃度對(duì)細(xì)胞增殖均有抑制作用，且隨著濃度的增加，增殖抑制率升高，與對(duì)照組比較有顯

5、著性差異（P<0．05）和極顯著性差異（P<0．01）；72h后作用較穩(wěn)定，各處理組與對(duì)照組比較均有顯著性差異（P<0．05）。（3）17-βE2聯(lián)合順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞HO-8910增殖的增效作用：順鉑聯(lián)用1×10-917-βE2表現(xiàn)為相加作用（0．851．15）。 3．順鉑、17-βE2及兩藥聯(lián)合對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株HO-8910細(xì)

6、胞周期及凋亡率的影響：（1）經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)，人卵巢癌細(xì)胞HO-8910細(xì)胞周期分布發(fā)生改變，與對(duì)照組比較，雌激素組S期細(xì)胞比例上升，凋亡率下降；順鉑組G0/G1期細(xì)胞比例上升，S期細(xì)胞比例下降，凋亡率上升。雌激素聯(lián)合順鉑組S期細(xì)胞比例進(jìn)一步下降，凋亡率明顯上升，與對(duì)照組和順鉑組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。（2）Annexin-V/PI染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示：①不同濃度的17-βE2作用下卵巢癌細(xì)胞HO-8910的細(xì)

7、胞凋亡率分別為6．3％，6．0％，5．6％和5．1％與對(duì)照組（6．1％）相比較，差異無(wú)顯著性，P>0．05。提示任何濃度的17-βE2均不能誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞HO-8910產(chǎn)生凋亡。②順鉑作用下卵巢癌細(xì)胞HO-8910的細(xì)胞凋亡率為15．6％，與對(duì)照組（6．93％）相比較，差異有顯著性，P<0．05。③不同濃度17-βE2聯(lián)合順鉑作用下，卵巢癌細(xì)胞HO-8910的細(xì)胞凋亡率分別為16．8％，29．7％，31．2％，44．0％，與對(duì)照組（6．

8、93％）相比較，差異有顯著性，P<0．01。 結(jié)論: 1．17-βE2不能誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞HO-8910發(fā)生凋亡，低濃度對(duì)卵巢癌細(xì)胞無(wú)作用，高濃度對(duì)細(xì)胞有明顯的促進(jìn)生長(zhǎng)作用，提示在卵巢癌患者，給于低劑量激素替代治療，不會(huì)增加卵巢癌的復(fù)發(fā)。 2．17-βE2聯(lián)合順鉑可改變細(xì)胞周期的分布，使G0/G1期細(xì)胞比例上升，S期細(xì)胞比例下降，協(xié)同抑制卵巢癌細(xì)胞HO-8910的增殖、促進(jìn)其凋亡。提示雌激素與順鉑聯(lián)用可提高順鉑的