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1、目的: 探討17-βE2聯(lián)合順鉑對卵巢癌細(xì)胞株HO-8910體外生長、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響。 方法: 1.采用MTT法檢測雌激素單用及合用順鉑對細(xì)胞增殖的影響。 2.流式細(xì)胞儀分析不同濃度雌激素及聯(lián)合順鉑對細(xì)胞周期和凋亡的影響。 3.光鏡、激光共聚焦顯微鏡觀察雌激素及雌激素聯(lián)合順鉑對細(xì)胞形態(tài)的影響。 結(jié)果: 1.人卵巢癌細(xì)胞HO-8910形態(tài)學(xué)變化(1)倒置顯微鏡觀察:對照組和
2、雌激素組卵巢癌細(xì)胞生長狀態(tài)良好,細(xì)胞伸展,呈鋪路石狀,隨時間推移,細(xì)胞漸增多,細(xì)胞接觸緊密。雌激素聯(lián)合順鉑組卵巢癌細(xì)胞24h時見到細(xì)胞數(shù)目較少,但形態(tài)尚可,隨時間推移,細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡,培養(yǎng)至72h時,細(xì)胞明顯皺縮,體積變小,細(xì)胞間隙增大,培養(yǎng)液內(nèi)可見少量細(xì)胞懸浮,部分細(xì)胞可見碎裂的細(xì)胞核,而胞漿仍完整。(2)激光共聚焦顯微鏡觀察:對照組可見極少量凋亡細(xì)胞,順鉑組,雌激素組與對照組無明顯差異。雌激素與順鉑聯(lián)用組出現(xiàn)大量典型的凋亡細(xì)胞,細(xì)
3、胞膜染色明顯增強,熒光更為明亮,強度深淺不一。 2.順鉑、17-βE2及兩藥聯(lián)合對人卵巢癌細(xì)胞株HO-8910增殖、凋亡的影響(1)17-βE2對卵巢癌細(xì)胞株HO-8910增殖的抑制作用:17-βE2作用24h后HO-8910細(xì)胞生長輕度增殖,但無顯著性差異(P>0.05):48h后濃度為10×10-9~50×10-9mol/L,對細(xì)胞增殖有促進(jìn)作用,增殖促進(jìn)率分別為22.8%和26.5%與對照組比較有顯著性差異(P<0.05)
4、;72h后17-βE2作用較穩(wěn)定,各處理組與對照組比較無顯著性差異(p>0.05)。(2)17-βE2聯(lián)合順鉑對卵巢癌細(xì)胞HO-8910增殖的抑制作用:17-βE2聯(lián)合順鉑作用24 h后HO-8910細(xì)胞生長輕度抑制,50×10-9mol/L濃度對細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用,有顯著性差異(P<0.05);48 h后5×10-9mol/L-50×10-9mol/L濃度對細(xì)胞增殖均有抑制作用,且隨著濃度的增加,增殖抑制率升高,與對照組比較有顯
5、著性差異(P<0.05)和極顯著性差異(P<0.01);72h后作用較穩(wěn)定,各處理組與對照組比較均有顯著性差異(P<0.05)。(3)17-βE2聯(lián)合順鉑對卵巢癌細(xì)胞HO-8910增殖的增效作用:順鉑聯(lián)用1×10-917-βE2表現(xiàn)為相加作用(0.851.15)。 3.順鉑、17-βE2及兩藥聯(lián)合對人卵巢癌細(xì)胞株HO-8910細(xì)
6、胞周期及凋亡率的影響:(1)經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測,人卵巢癌細(xì)胞HO-8910細(xì)胞周期分布發(fā)生改變,與對照組比較,雌激素組S期細(xì)胞比例上升,凋亡率下降;順鉑組G0/G1期細(xì)胞比例上升,S期細(xì)胞比例下降,凋亡率上升。雌激素聯(lián)合順鉑組S期細(xì)胞比例進(jìn)一步下降,凋亡率明顯上升,與對照組和順鉑組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(2)Annexin-V/PI染色法檢測細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示:①不同濃度的17-βE2作用下卵巢癌細(xì)胞HO-8910的細(xì)
7、胞凋亡率分別為6.3%,6.0%,5.6%和5.1%與對照組(6.1%)相比較,差異無顯著性,P>0.05。提示任何濃度的17-βE2均不能誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞HO-8910產(chǎn)生凋亡。②順鉑作用下卵巢癌細(xì)胞HO-8910的細(xì)胞凋亡率為15.6%,與對照組(6.93%)相比較,差異有顯著性,P<0.05。③不同濃度17-βE2聯(lián)合順鉑作用下,卵巢癌細(xì)胞HO-8910的細(xì)胞凋亡率分別為16.8%,29.7%,31.2%,44.0%,與對照組(6.
8、93%)相比較,差異有顯著性,P<0.01。 結(jié)論: 1.17-βE2不能誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞HO-8910發(fā)生凋亡,低濃度對卵巢癌細(xì)胞無作用,高濃度對細(xì)胞有明顯的促進(jìn)生長作用,提示在卵巢癌患者,給于低劑量激素替代治療,不會增加卵巢癌的復(fù)發(fā)。 2.17-βE2聯(lián)合順鉑可改變細(xì)胞周期的分布,使G0/G1期細(xì)胞比例上升,S期細(xì)胞比例下降,協(xié)同抑制卵巢癌細(xì)胞HO-8910的增殖、促進(jìn)其凋亡。提示雌激素與順鉑聯(lián)用可提高順鉑的
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