MicroRNA 95通過其靶點ST7L激活A(yù)kt-GSK3β-β-catenin通路促進HCC增殖和遷移.pdf

1、目的：肝細胞癌（HCC）是一種威脅人類生命的惡性腫瘤，其發(fā)病機制尚未確定。對于原發(fā)性肝癌的分子機制研究目前是國內(nèi)外的一個研究熱點，許多 microRNA（miRNA）已被證明在肝癌發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色。我們選取了 miR-95這一microRNA，而且已有許多研究表明，miR-95可以促進許多腫瘤生長，如結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌和非小細胞肺癌等。本課題在已有研究的基礎(chǔ)上著重研究MicroRNA95在HCC發(fā)生以及發(fā)展

2、中的作用。
　　方法：miRNA高通量測序技術(shù)及qRT-PCR檢測miR-95在肝癌組織及正常肝組織中的表達；CCK8以及克隆形成實驗研究miR-95及ST7L在體外對HCC增殖的影響；劃痕實驗以及Transwell實驗研究miR-95及ST7L在體外對HCC遷移的影響；裸鼠成瘤實驗及裸鼠肝癌肺轉(zhuǎn)移實驗研究miR-95及ST7L在動物體內(nèi)對HCC增殖及遷移的影響；qRT-PCR實驗研究miR-95/ST7L/Akt/GSK3β/β

3、-catenin信號軸下游相關(guān)基因mRNA水平的變化；western-blot實驗研究miR-95/ST7L/Akt/GSK3β/β-catenin信號軸相關(guān)蛋白及其下游相關(guān)蛋白水平的改變；免疫熒光實驗對ST7L及AKT蛋白進行細胞共定位；免疫組化實驗檢測HCC組織及裸鼠肝癌組織相關(guān)蛋白的水平；雙熒光素酶報告基因?qū)嶒炑芯縨iR-95對ST7L基因表達的調(diào)控；CO-IP實驗研究ST7L與AKT的相互作用；運用SPSS對miR-95的表達水

4、平與HCC各臨床病理因素的關(guān)系進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：組織學(xué)實驗結(jié)果顯示 miR-95在肝癌組織的表達顯著高于正常肝組織，且miR-95的表達水平與肝癌的腫瘤大小及腫瘤數(shù)目密切相關(guān)；CCK8和克隆形成實驗結(jié)果提示miR-95在體外能夠促進HCC的增殖；劃痕實驗以及Transwell實驗結(jié)果顯示miR-95在體外能夠促進HCC遷移；在動物體內(nèi)裸鼠成瘤實驗及裸鼠肝癌肺轉(zhuǎn)移實驗研究miR-95能夠促進 HCC增殖及遷移；雙熒光素酶報

5、告基因?qū)嶒烇@示ST7L是miR-95的直接作用靶點；免疫組化的結(jié)果提示HCC組織中ST7L蛋白的表達水平與miR-95的表達水平呈明顯負相關(guān)；回復(fù)實驗結(jié)果顯示ST7L在體外及體內(nèi)能夠逆轉(zhuǎn)miR-95引起的HCC增殖；機制研究的結(jié)果顯示miR-95可以通過其靶點ST7L調(diào)節(jié)Akt/GSK3β/β-catenin信號通路，并引起Akt/ GSK3β/β-catenin信號軸相關(guān)蛋白及其下游相關(guān)基因的 mRNA及蛋白水平的改變；免疫熒光實驗發(fā)

6、現(xiàn) ST7L及 AKT蛋白有相同的細胞定位；CO-IP實驗結(jié)果顯示ST7L能夠與AKT羧基末端相互作用抑制Akt（Ser473）的磷酸化。
　　結(jié)論：研究表明，在人體HCC組織中，miR-95在肝癌組織的表達顯著高于正常肝組織，且miR-95的表達水平與肝癌的腫瘤大小及腫瘤數(shù)目密切相關(guān)；生物學(xué)功能研究表明在體外及動物體內(nèi)miR-95可以促進HCC的增殖及遷移；機制研究表明，ST7L能夠與AKT羧基末端相互作用從而抑制Akt（Ser