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1、目的:建立四種大鼠實(shí)驗(yàn)性肺動(dòng)脈高壓模型,即低氧模型、野百合堿模型、高肺血流模型以及新生內(nèi)膜模型,觀察廣譜基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)抑制劑多西環(huán)素對(duì)這幾種模型肺動(dòng)脈高壓肺血管重構(gòu)的影響,從而探討MMPs在肺動(dòng)脈高壓肺血管重構(gòu)中的作用,并了解這種作用在不同病理生理?xiàng)l件所致的肺血管重構(gòu)中是否具有普遍意義。 方法:將成年健康雄性SD大鼠(350-400g),隨機(jī)分為正常組(N)、低氧模型組(H)及其干預(yù)組(HD)、野百合堿模型組(M)及
2、其干預(yù)組(MD)、高肺血流模型組(P)及其干預(yù)組(PD)、新生內(nèi)膜模型組(PM)及其干預(yù)組(PMD)。高肺血流模型通過(guò)左肺切除建立,新生內(nèi)膜模型通過(guò)左肺切除加野百合堿注射建立。干預(yù)藥物多西環(huán)素(20mg/kg.d.灌胃)均于模型建立2天前開(kāi)始給予直至實(shí)驗(yàn)終止。4周后(新生內(nèi)膜模型為5周)觀察各組的平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)、右心指數(shù)即“右心室/左心室+室間膈”重量比;光鏡觀察肺小動(dòng)脈中膜厚度百分比、、肺非肌性小動(dòng)脈肌化程度、血管外膜膠原沉
3、積以及新生內(nèi)膜產(chǎn)生情況;觀察肺小血管管壁細(xì)胞增殖度和凋亡蛋白Caspase-3表達(dá)變化;免疫組化和實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)MMP-2,9以及組織抑制因子-1(TIMP-1)在肺組織中的表達(dá)情況;明膠酶譜法檢測(cè)肺組織勻漿中明膠酶活性的變化情況。 結(jié)果:①mPAP和右心指數(shù),各模型組(H,M,P,PM)均高于正常組(N)和其相應(yīng)的干預(yù)組(HD,MD,PD,PMD),(P<0.01)。②肺小動(dòng)脈管壁厚度百分比、肺非肌性小
4、動(dòng)脈肌化程度、肺小血管管壁細(xì)胞增殖度和血管外膜膠原沉積4項(xiàng)指標(biāo),各模型組均高于正常組和其相應(yīng)的干預(yù)組,(P<0.01)。③Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)各模型組均低于其相應(yīng)的干預(yù)組,(P<0.01)。④除PM和PMD組外,其他組均未見(jiàn)新生內(nèi)膜形成。新生內(nèi)膜增殖度PM組高于PMD組,(P<0.01)。⑤免疫組化和RT-PCR對(duì)MMP-2,9在肺組織中的表達(dá)定量顯示各模型組均高于正常組(N)和其相應(yīng)的干預(yù)組,(P<0.01)。肺組織勻漿中明膠酶
5、活性,各模型組均高于正常組(N)和其相應(yīng)的干預(yù)組(P<0.01)。⑥免疫組化和RT-PCR對(duì)TIMP-1在肺組織中的表達(dá)定量顯示其變化趨勢(shì)與MMPs在肺組織的表達(dá)變化趨勢(shì)一致,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P<0.01)。 結(jié)論:廣譜MMPs抑制劑多西環(huán)素能減輕4種模型的肺動(dòng)脈高壓和肺血管重構(gòu),提示MMPs高表達(dá)可能在肺動(dòng)脈高壓肺血管重構(gòu)的形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在4種不同病理生理?xiàng)l件下得到的結(jié)論一致,提示這種作用可能具有普遍意義。多西環(huán)
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