靶向Bcl-2基因的RNA干擾治療人肝細(xì)胞癌裸鼠模型的實驗研究.pdf

1、廣東醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文靶向Bcl2基因的RNA干擾治療人肝細(xì)胞癌裸鼠模型的實驗研究姓名：許剛申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（肝膽外科）指導(dǎo)教師：李明意20080501靶向BcI2基因的RNA干擾治療人肝細(xì)胞癌裸鼠模型的實驗研究摘要【目的】探討靶向Bcl2基因的RNA干擾對人肝癌細(xì)胞的成瘤能力和對裸鼠皮下移植瘤的治療效果，以及RNA干擾技術(shù)在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機制，為肝癌的基因治療提供新的靶點和理論依據(jù)。【方法】1采用人肝癌BEL

2、7402細(xì)胞株傳代培養(yǎng)技術(shù)完成該細(xì)胞的體外培養(yǎng)。同時將符合實驗條件的裸鼠分為四組，分別為：干擾組(A)、陰性對照組(B)、空白對照組(C)和轉(zhuǎn)染后接種組(D)，每組6只，周齡在“周，重量在17209之間，均雌雄各半。2裸鼠移植瘤模型的建立：A、B、C三個組是在裸鼠皮下接種未轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞，待腫瘤直徑達(dá)到57mm時，三組裸鼠瘤體分別注射StealthTMRNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物、陰性鏈復(fù)合物和無血清培養(yǎng)基，隔天注射一次，共七次。D組是BEL7402

3、細(xì)胞經(jīng)StealthTMRNA復(fù)合物轉(zhuǎn)染后收集細(xì)胞進行裸鼠皮下接種并進行成瘤觀察。3A、B、C三組裸鼠瘤體注射完成后7天，所有裸鼠測量腫瘤體積并眼球取血處死，剝離腫瘤組織計算抑瘤率及生長指數(shù)。每個瘤體隨機切取一部分直接放進4％多聚甲醛固定液備免疫組化檢測，另外一部分放進液氮保存?zhèn)銻TPCR檢測，眼球血液標(biāo)本置40C冰箱過夜后離心收集血清。4SP免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測StealthTMRNA干擾后各組腫瘤組織中Bcl2蛋白表達(dá)。5RTPCR