XPO5基因MicroRNA結(jié)合位點單核苷酸多態(tài)性與晚期非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、目的:肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響人類生命及健康。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的80％以上，大約三分之一的非小細(xì)胞肺癌患者在診斷時已是晚期或局部晚期階段。MicroRNA(miRNA)是一類小型的非編碼RNA，由大約22個核苷酸組成，作為監(jiān)管機(jī)構(gòu)調(diào)控mRNA轉(zhuǎn)錄后表達(dá)。越來越多的證據(jù)表明，microRNA在一個廣泛的生物過程中發(fā)揮重要作用，如胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、增殖、凋亡、癌癥發(fā)展和胰島素分泌。單核苷酸多態(tài)性(Sin

2、glenucleotidepolymorphism，SNP)主要是指染色體基因組水平上單個核苷酸變異引起的DNA序列的多態(tài)性。近年來研究發(fā)現(xiàn)MicroRNA的合成過程及其靶基因結(jié)合位點的SNP可影響MicroRNA調(diào)控功能的發(fā)揮，并產(chǎn)生顯著的遺傳學(xué)效應(yīng)。XPO5在miRNA形成過程中起重要的作用，XPO5基因與miRNA的核輸出相關(guān)，降低XPO5的表達(dá)可使miRNA的表達(dá)水平整體下降。目前對XPO5基因與肺癌的研究較少，本研究對XPO5

3、基因MicroRNA的SNP與晚期非小細(xì)胞肺癌預(yù)后及化療療效的關(guān)系進(jìn)行了研究，為肺癌的預(yù)后評價提供了新思路。
　　 方法:采集2004年12月至2011年12月期間就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院呼吸內(nèi)科的106例非小細(xì)胞肺癌患者標(biāo)本，所有患者經(jīng)組織病理和/或細(xì)胞病理確診為非小細(xì)胞肺癌，臨床資料齊全，包括年齡、性別、病理類型、TNM分期、吸煙與否、治療情況、生存時間等。均于放、化療治療前空腹采集患者靜脈血液，取血標(biāo)本約5ml至于枸櫞酸

4、納試管中，已取標(biāo)本2周內(nèi)采用蛋白酶K-氯化鈉鹽析法提取DNA，鑒定合格的DNA置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。根?jù)NCBISNP數(shù)據(jù)庫設(shè)計上下游引物，采用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction)擴(kuò)增目的片段，凝膠電泳法確定目的片段擴(kuò)增成功，證實擴(kuò)增成功后送往上海捷瑞生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司，使用連接酶反應(yīng)(ligasedetectionreaction，LDR)技術(shù)，對SNP位點進(jìn)行檢測，對XPO5基因MicroRNA結(jié)

5、合位點rs11077單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行基因分型。對照組70例為在本院體檢中心進(jìn)行健康體檢的人員，經(jīng)過胸部X線、腹部超聲等檢查除外腫瘤及與非小細(xì)胞肺癌存在相關(guān)的疾病，且與病例組無血緣關(guān)系，無遺傳性疾病病史和腫瘤家族史。
　　 統(tǒng)計方法:對肺癌組與對照組的SNP分布頻率及肺癌組不同臨床特征、不同基因型的化療療效總有效率分析采用X2檢驗。采用Kaplan-Meier法估計各組間生存率并繪制生存曲線，用Log-Rank法對各組生存曲線的

6、分布異同進(jìn)行檢驗，比較生存率有無差別。采用Cox回歸模型進(jìn)行多因素分析，確定影響預(yù)后的獨立危險因素。
　　 所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析均采用SPSS18.0版軟件包進(jìn)行，結(jié)果以P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、XPO5基因rs11077位點測序結(jié)果:rs11077位點基因型分別為CC，AC和AA，不同基因型出現(xiàn)的頻率在正常對照組分別為:1，12和57;與正常人相比較，非小細(xì)胞肺癌患者不同基因型出現(xiàn)頻

7、率分別為0，16和90。C等位基因出現(xiàn)頻率較小。目前沒有明顯統(tǒng)計學(xué)意義證明106例非小細(xì)胞肺癌患者與70例正常人之間的肺癌發(fā)病風(fēng)險與rs11077SNP有關(guān)(P=0.685)。
　　 2、所有非小細(xì)胞肺癌患者中，單因素分析:不同基因型:AA與AC基因型，AA型兩年生存率為15.6％，AC型兩年生存率37.5％，P值=0.001，兩種基因型對預(yù)后影響差別有統(tǒng)計學(xué)意義。不同性別:男性兩年生存率15.9％，女性兩年生存率24.3％，P

8、=0.475;不同年齡:≤60歲兩年生存率22.5％，＞60歲兩年生存率19.3％，P=0.518;不同吸煙情況:吸煙組兩年生存率21.7％，不吸煙組兩年生存率16.7％，P=0.313;不同病理類型:鱗癌組兩年生存率18.2％，腺癌組兩年生存率19.2％，P=0.757;不同化療方案:GP方案組兩年生存率15.4％，TP方案組兩年生存率20.0％，NP方案組兩年生存率24.1％，P=0.561。不同性別、年齡、吸煙情況、病理類型及不同

9、化療方案均對預(yù)后影響差別無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3、多因素分析:不同基因型:AA基因型與AC基因型:P=0.002，RR=0.367，95％CI=0.192-0.699;AC基因型的死亡風(fēng)險為AA基因型死亡風(fēng)險的0.367倍。不同性別:男性與女性患者，P=0.073，RR=0.168，95％CI=0.365-1.046;不同年齡:≤60歲組與＞60歲組，P=0.775，RR=1.061，95％CI=0.706-1.595;不同

10、TNM分期:Ⅲ期組與Ⅳ期組患者:P=0.348，RR=0.786，95％CI=0.475-1.300;不同吸煙情況:吸煙組與不吸煙組:P=0.070，RR=1.631，95％CI=0.962-2.765;不同病理類型:鱗癌組與腺癌組，P=0.717，RR=1.092，95％CI=0.679-1.755;不同化療方案:GP組、TP組與NP組:P=0.197，RR=0.855，95％CI=0.675-1.084。不同性別、年齡、TNM分期、

11、吸煙情況、病理類型、及不同化療方案與非小細(xì)胞肺癌患者死亡風(fēng)險均無關(guān)。
　　 4、綜合單因素及多因素分析結(jié)果，XPO5基因rs11077位點的單核苷酸多態(tài)性是影響非小細(xì)胞肺癌生存期的獨立預(yù)后因素。
　　 5、治療結(jié)果:對不同基因型患者化療療效分析采用X2檢驗，擁有AC基因型的患者療效優(yōu)于AA基因型患者(P=0.008)。
　　 6對不同臨床特征與化療療效關(guān)系的X2檢驗中，在包括性別、年齡、分期、吸煙情況、病理類型、

12、及不同化療方案的臨床特征中，只有TNM分期與化療療效有差異(P=0.036)。
　　 結(jié)論:
　　 1、正常人和非小細(xì)胞肺癌患者rs11077多態(tài)位點基因型中，C等位基因分布較少，非小細(xì)胞肺癌發(fā)病風(fēng)險與AA、AC基因型分布頻率差別無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2、XPO5基因rs11077位點單核苷酸多態(tài)性與非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后相關(guān)，XPO5基因可以作為非小細(xì)胞肺癌預(yù)后的獨立危險因素，AC基因型的非小細(xì)胞肺癌患者較A