PV-殺白細(xì)胞素(PVL)S組分對(duì)人急性髓系白血病THP-1細(xì)胞株的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:PV-殺白細(xì)胞素(Panton-ValentineLeukocidin,PVL)是由金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的細(xì)胞外毒素。PVL有LukS-PV和LukF-PV兩個(gè)成分組成。在先前的研究中,我們報(bào)道了PVL及其組分能夠誘導(dǎo)人多形核粒細(xì)胞凋亡。本課題的目的:(1)檢測(cè)rLukS對(duì)人髓系白血病THP-1細(xì)胞增殖和凋亡的影響;(2)探討rLukS對(duì)THP-1細(xì)胞增殖抑制和誘導(dǎo)凋亡的作用機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)THP-1細(xì)胞,用不同濃度

2、rLukS(0,0.05,0.25,0.5,0.75和1μM/L)作用THP-1細(xì)胞3,6,9和12h,采用MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率;分別用不同濃度rLukS(0,0.05,0.5和1μM/L)作用于THP-1細(xì)胞12h后,用TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡壞死;利用流式細(xì)胞儀通過AnnexinVFITC/PI染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡,PI染色法檢測(cè)細(xì)胞周期;用Westernblot方法檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白;用凋亡PCR芯片(CatalogNo.PAH

3、S-012A),檢測(cè)經(jīng)1μM/LrLukS處理前后凋亡相關(guān)基因表達(dá)的差異,然后采用Westernblot方法驗(yàn)證芯片結(jié)果。
　　結(jié)果:rLukS抑制THP-1細(xì)胞的增殖,且抑制作用呈時(shí)間濃度依賴關(guān)系;rLukS將THP-1細(xì)胞阻滯在G0/G1期并且下調(diào)細(xì)胞周期蛋白cyclinD1;rLukS誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡率和濃度成正比;芯片結(jié)果顯示經(jīng)1μM/LrLukS處理的THP-1細(xì)胞前后基因表達(dá)差異主要涉及的是Bcl-2家族、caspase